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晓惜凝香

新虫 (初入文坛)

[求助] 电泳多条带

1.pcr产物电泳后有多条带,除了目的带之外的带可能性原因有哪些呢?
2.用M13筛克隆电泳后除目的带外还有像引物二聚体似的带,是什么带呢?
求解~
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
晓惜凝香(金币+2): 多谢 2011-08-22 11:43:55
lstt09nk(金币+5): 感谢参与 2011-08-22 12:38:20
排除了电泳没有污染其他DNA之后,可以从PCR过程找原因。
1,退火温度:退火温度越高,特异性越好。
2,Mg2+浓度:一般都是预加的。理论上Mg2+浓度高会引起扩增特异性降低。
3,引物的特异性:这个不用说了。
4,模板量:模板适量,不要太多。
5,DNA污染:这种情况遇到较少。
6,酶的质量:好多国产酶不给力。
M13一般不会出现二聚体的,我的PCR一般会在200bp出现很亮条带,我认为时非特异性扩增。
2楼2011-08-22 11:35:40
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