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丫头小盆子

新虫 (小有名气)

[求助] 大神帮忙。载体连接不上,我欲哭无泪呀,好心的路过的帮帮忙

各位大神帮帮忙,我最近在连载体,双酶切PCR产物连接,发现T载体PCR做胶回收,回收后取1ul检测回收效果发现,除目的条带大概500bp处有亮带外,1000bp处还隐约有条带存在。然后我继续往后做双酶切,双酶切用SacI和BamhI,37°C,6h左右再做胶回收,胶回收后1ul检测,仍然存在两条带。现在我已经排除是跑胶或者是回收的问题了,下一步准备排除可能存在酶污染的问题。
所以我想问的就是(1):为什么我PCR产物切胶回收,切的是目的条带,回收后检测却会出现杂带呢?
下面有我的跑胶图片,各位大神帮忙看看吧,我连这个载体都快一个月了,都还没连上,老板也使劲催,压力山大呀。谢谢各位师兄师姐了。(因为我刚注册,也还不会怎么操作小木虫,所以没什么金币,不能悬赏,各位大神见谅,^-^)
PS:图片说明:marker条带依次是5000bp,3000bp,2000bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp.第一张图是我T载体PCR回收图,第二张图是PCR产物回收后1ul检测图,第三张图是回收的pcr产物双酶切再跑胶回收后1ul的检测图。

图片.jpg
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