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[求助]
大神帮忙。载体连接不上，我欲哭无泪呀，好心的路过的帮帮忙
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各位大神帮帮忙，我最近在连载体，双酶切PCR产物连接，发现T载体PCR做胶回收，回收后取1ul检测回收效果发现，除目的条带大概500bp处有亮带外，1000bp处还隐约有条带存在。然后我继续往后做双酶切，双酶切用SacI和BamhI，37°C，6h左右再做胶回收，胶回收后1ul检测，仍然存在两条带。现在我已经排除是跑胶或者是回收的问题了，下一步准备排除可能存在酶污染的问题。 所以我想问的就是（1）：为什么我PCR产物切胶回收，切的是目的条带，回收后检测却会出现杂带呢？ 下面有我的跑胶图片，各位大神帮忙看看吧，我连这个载体都快一个月了，都还没连上，老板也使劲催，压力山大呀。谢谢各位师兄师姐了。（因为我刚注册，也还不会怎么操作小木虫，所以没什么金币，不能悬赏，各位大神见谅，^-^) PS：图片说明：marker条带依次是5000bp,3000bp,2000bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp.第一张图是我T载体PCR回收图，第二张图是PCR产物回收后1ul检测图,第三张图是回收的pcr产物双酶切再跑胶回收后1ul的检测图。  图片.jpg |
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