24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 12073  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

哥哥呵呵笑

新虫 (初入文坛)

[求助] 启动子与ATG的问题 已有4人参与

各位大神,我在做表达载体,因为一开始没经验,当初在设计引物的时候在5’和3’端都加上了保护碱基(貌似都只在5‘端加),
结果现在做出来的表达载体测序发现在目的基因前面多了2个碱基。
我的目的基因本身是ATG开始,TAA结尾的,现在相当于在ATG前面多了CG两个碱基。
我用的pET-28α(+),NheI、XhoI双酶切,看了下图谱,从T7启动子到目的基因之间载体本身还有2个ATG位点,我又好死不死的在
目的基因前面多加了个CG,现在搞得不是3的整数倍了……
想请教大家,启动子转录之后的翻译是怎样的?是从载体本身的第一个ATG开始,还是从每一个ATG都会各自翻译出一条蛋白
我现在希望它能从目的基因的开头那个ATG翻译出来一条,那前面那个CG是不是就不会引起后面的框移突变了?
谢谢各位了!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哥哥呵呵笑

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ltf329395464 at 2015-12-16 14:41:12
仔细看载体图谱。PET-28a如果要用Xho I做下游引物,一定要补齐你酶切时损失的那个碱基,不然就移码了。

请问一下原核表达是从启动子后面的第一个ATG开始往下延伸还是说每一个ATG开始都会各自翻译?
5楼2015-12-16 15:31:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

wujiangjack

银虫 (初入文坛)

这个载体上面带有His标签,看你选择了,前后都有
2楼2015-12-16 10:11:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哥哥呵呵笑

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wujiangjack at 2015-12-16 10:11:55
这个载体上面带有His标签,看你选择了,前后都有

你好,我想问的是蛋白翻译,跟his貌似没关系吧?
3楼2015-12-16 10:19:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ltf329395464

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
仔细看载体图谱。PET-28a如果要用Xho I做下游引物,一定要补齐你酶切时损失的那个碱基,不然就移码了。
ONLY I CAN !
4楼2015-12-16 14:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +3 李木子0120 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:45 by dongzh2009
[考研] 343求调剂085601 +5 要努力学习x 2026-03-29 6/300 2026-04-02 21:18 by 1104338198
[考研] 学硕机械工程303求调剂 +5 无名所以叫吴明 2026-03-30 5/250 2026-04-02 20:12 by hengsmith
[考研] 085602化工求调剂(331分) +9 111@127 2026-03-30 9/450 2026-04-02 20:00 by dick_runner
[考研] 298求调剂 +4 zzz,,r 2026-04-02 7/350 2026-04-02 18:57 by 1939136013狗壮
[考研] 290求调剂085701 +3 1314捧花 2026-04-02 3/150 2026-04-02 13:34 by Ecowxq666!
[考研] 08开头看过来!!! +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 348环境工程调剂 +3 吴彦祖24k 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:14 by nanaliuyun
[考研] 求调剂,一志愿南京师范大学计算机专硕,初试373,六级通过, +3 计算机追梦人 2026-04-01 3/150 2026-04-02 07:57 by fxue1114
[考研] 生物学327,求调剂 +5 书上的梅子 2026-04-01 6/300 2026-04-02 06:47 by ilovexiaobin
[考研] 085600 一志愿9 总分351 求调剂学校 +7 czhcz 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:24 by 无际的草原
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +7 @taotao 2026-03-30 7/350 2026-04-01 14:30 by chenqifeng666
[考研] 301求调剂 +8 axibli 2026-04-01 8/400 2026-04-01 09:51 by 我的船我的海
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
[考研] 求调剂 生物学 377分 +6 zzll03 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:33 by 唐沐儿
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 334求调剂 +7 Trying] 2026-03-31 7/350 2026-03-31 12:33 by 无际的草原
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
[考研] 0703 化学 求调剂,一志愿山东大学 342 分 +7 Shern—- 2026-03-28 7/350 2026-03-30 16:31 by nothing投稿中
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
信息提示
请填处理意见