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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒大提浓度很低，怎么办？
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苏三加油没

木虫 (初入文坛)

[求助] 质粒大提浓度很低，怎么办？ 已有7人参与

摇菌1ml4小时后，转到100ml LB+amp的培养液中37度18小时，中提，加50ulDEPC水溶解，浓度只有90ng/ul.之前，实验室别人提质粒都是1ug/ul，换过新的LB+amp的培养基，还是浓度太低，怎么解决？需要中提获得大量质粒，急求！
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生而无憾，活得精彩
1楼 2015-12-16 01:34:11
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amandav108

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

拷贝低的质粒， 我是5ml 8小时 500-1000ml 16-18小时，用大提试剂盒最好有指示剂 可以看到裂解充不充分，同样的质粒用小提试剂盒效果却非常差
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7楼2015-12-29 16:41:43
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川大太行

金虫 (正式写手)
最后洗脱液是什么？

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不惧不惑向阳而生
2楼2015-12-23 16:17:19
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苏三加油没

木虫 (初入文坛)
灭菌水

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生而无憾，活得精彩
3楼2015-12-24 02:06:26
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lwmhxy

木虫 (初入文坛)
转摇比例大一点，可以先转摇10ml的，再转摇100的

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遇一人白首，择一城终老
4楼2015-12-24 09:20:42
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大脸猫ld

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的质粒本身拷贝数和别人的一样吗？拷贝数不好的话就只能加大菌液量了。
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5楼2015-12-24 10:55:56
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

质粒拷贝低需要加大菌液量，相应的也要提高试剂量。裂解不充分也会出现提取低，可以试试换一下裂解液。还有可以试试把培养基改变一下浓度。使营养富集。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
6楼2015-12-24 11:21:56
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以试试将质粒转化后挑斑摇菌，再扩大培养
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8楼2015-12-29 17:13:47
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Merrylegs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

个人经验，跟试剂盒有很大关系，我只发现Axygen（现归属Corning）的大提试剂盒效果好，100mL菌液（非低拷贝质粒）可以提取400-600μg的质粒DNA。国内某品牌的试剂盒提取量只有＜100μg。
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9楼2015-12-30 09:56:17
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兽医做科研

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那就要看你的质粒是低拷贝还是高拷贝了

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10楼2015-12-30 17:31:30
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