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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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苏三加油没

木虫 (初入文坛)

[求助] 质粒大提浓度很低,怎么办?已有7人参与

摇菌1ml4小时后,转到100ml LB+amp的培养液中37度18小时,中提,加50ulDEPC水溶解,浓度只有90ng/ul.之前,实验室别人提质粒都是1ug/ul,换过新的LB+amp的培养基,还是浓度太低,怎么解决?需要中提获得大量质粒,急求!
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生而无憾,活得精彩
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amandav108

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

拷贝低的质粒, 我是5ml 8小时 500-1000ml 16-18小时,用大提试剂盒最好有指示剂 可以看到裂解充不充分,同样的质粒用小提试剂盒效果却非常差
7楼2015-12-29 16:41:43
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普通回帖

川大太行

金虫 (正式写手)

不惧不惑向阳而生
2楼2015-12-23 16:17:19
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苏三加油没

木虫 (初入文坛)

生而无憾,活得精彩
3楼2015-12-24 02:06:26
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lwmhxy

木虫 (初入文坛)

转摇比例大一点,可以先转摇10ml的,再转摇100的

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遇一人白首,择一城终老
4楼2015-12-24 09:20:42
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大脸猫ld

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的质粒本身拷贝数和别人的一样吗?拷贝数不好的话就只能加大菌液量了。
5楼2015-12-24 10:55:56
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

质粒拷贝低需要加大菌液量,相应的也要提高试剂量。裂解不充分也会出现提取低,可以试试换一下裂解液。还有可以试试把培养基改变一下浓度。使营养富集。

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
6楼2015-12-24 11:21:56
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以试试将质粒转化后挑斑摇菌,再扩大培养
8楼2015-12-29 17:13:47
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Merrylegs

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

个人经验,跟试剂盒有很大关系,我只发现Axygen(现归属Corning)的大提试剂盒效果好,100mL菌液(非低拷贝质粒)可以提取400-600μg的质粒DNA。国内某品牌的试剂盒提取量只有<100μg。
9楼2015-12-30 09:56:17
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兽医做科研

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那就要看你的质粒是低拷贝还是高拷贝了

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10楼2015-12-30 17:31:30
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