24小时热门版块排行榜    

查看: 8468  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

crab1983

铜虫 (小有名气)

[求助] 已知一个基因通过转录组获得的cDNA序列,如何设计引物克隆这个基因 已有1人参与

我手里有想要克隆的基因的转录组获得的cDNA序列,但不知道如何设计引物。我看有的人用RACE的方法克隆全长,我不需要克隆全长。我原来以为,把拿到的转录组的这个cDNA序列直接设计引物就行,但是我看到很多文献,都是找出开放阅读框来设计引物的。所以现在不知道该怎么做了,太着急了。请给位大侠帮帮忙。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crab1983

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2015-12-15 11:48:44
先用你的序列做blastx,看是否含有完整ORF,看编码区的具体位置,然后再根据你的需要设计引物,做定量的话,不需要有完整ORF,但是如果做表达研究功能,那需要有完整ORF,如没有,就做RACE扩全长。

我要转到拟南芥中,转到拟南芥里面主要鉴定一下这个基因。也就是得在拟南芥里表达

发自小木虫Android客户端
5楼2015-12-15 17:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

jianguochen

新虫 (小有名气)

主要还是看你扩增出来的序列用于做什么,表达的话可以分析下你的序列里共有多少个开放阅读框,哪个阅读框是你的序列。再根据ORF序列从起始密码子到终止密码子设计引物扩就是了。
2楼2015-12-14 18:39:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
crab1983: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-03-11 15:14:49
先用你的序列做blastx,看是否含有完整ORF,看编码区的具体位置,然后再根据你的需要设计引物,做定量的话,不需要有完整ORF,但是如果做表达研究功能,那需要有完整ORF,如没有,就做RACE扩全长。
3楼2015-12-15 11:48:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crab1983

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jianguochen at 2015-12-14 18:39:54
主要还是看你扩增出来的序列用于做什么,表达的话可以分析下你的序列里共有多少个开放阅读框,哪个阅读框是你的序列。再根据ORF序列从起始密码子到终止密码子设计引物扩就是了。

我就是要这个基因克隆出来,然后转到拟南芥里面,鉴定一下。该怎么做呀?

发自小木虫Android客户端
4楼2015-12-15 17:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +5 瞬息宇宙 2026-08-10 5/250 2026-08-11 09:29 by 铁帽子农民
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
信息提示
请填处理意见