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Mingle_Su银虫 (小有名气)
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CoIP/蛋白互作|| 阴性对照杂出条带 ||FLAG HA Triton 洗涤 原生质体瞬时表达已有2人参与
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阴性对照的也被沉淀下来了，一周的实验就这样废了，请各位资深朋友帮分析下原因。每个样品用了20ul带FLAG抗体的磁珠（sigma），孵育结合后用0.1%的Triton 100 洗涤4次，最后用50mM的Tris-HCl pH=7.5 洗涤，每次洗涤均用1mL的buffer。个人觉得应该不是珠子没洗干净，另外考虑蛋白直接结合磁珠，两个完全不相关的蛋白都可以结合磁珠更加不可能。只能想到以上两个比较直接原因，请各位高手指教。 具体问题见下图，谢谢！ CoIP |
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8楼2015-12-13 23:01:29
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Mingle_Su9楼2015-12-13 23:03:10
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但真的用错没有，FLAG的珠子是黑色的磁珠，HA的珠子是白色的没有磁性的。而且FLAG标签的蛋白在IP后明显富集了。。。10楼2015-12-13 23:56:09