24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 6187  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Mingle_Su

银虫 (小有名气)

[求助] CoIP/蛋白互作|| 阴性对照杂出条带 ||FLAG HA Triton 洗涤 原生质体瞬时表达 已有2人参与

阴性对照的也被沉淀下来了,一周的实验就这样废了,请各位资深朋友帮分析下原因。每个样品用了20ul带FLAG抗体的磁珠(sigma),孵育结合后用0.1%的Triton 100 洗涤4次,最后用50mM的Tris-HCl pH=7.5 洗涤,每次洗涤均用1mL的buffer。个人觉得应该不是珠子没洗干净,另外考虑蛋白直接结合磁珠,两个完全不相关的蛋白都可以结合磁珠更加不可能。只能想到以上两个比较直接原因,请各位高手指教。 具体问题见下图,谢谢!

CoIP/蛋白互作|| 阴性对照杂出条带 ||FLAG HA Triton 洗涤 原生质体瞬时表达
CoIP
回复此楼
Succeed
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mofashishe

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Mingle_Su at 2015-12-13 13:36:18
E81 和 E9 算是两个独立的实验,都出现了同样的问题,交叉反应的可能性应该不大。...

换一种凝胶试试了没?有没做过重复实验啊?从提提质粒开始,

发自小木虫Android客户端
6楼2015-12-13 14:30:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

陈爱中

新虫 (小有名气)

反正你都过表达的,为什么不直接做体外pull-down?
2楼2015-12-13 11:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mofashishe

铜虫 (小有名气)

e81那个样品和flag抗体有交叉反应?

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-13 11:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mingle_Su

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-12-13 11:19:35
反正你都过表达的,为什么不直接做体外pull-down?

原生质体过表达和原核过表达差挺多的。其实我同时在做酵母双杂交,BiFC 和共定位的实验,哈哈。
Succeed
4楼2015-12-13 13:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +6 荷包蛋hyj 2026-03-26 6/300 2026-03-27 10:24 by 尽舜尧1
[考研] 求调剂323材料与化工 +7 1124361 2026-03-24 7/350 2026-03-27 10:22 by wangjy2002
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +8 哈哈157349 2026-03-21 8/400 2026-03-27 10:15 by 六翼TMR
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 10/500 2026-03-26 22:37 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 7/350 2026-03-26 19:18 by macy2011
[考研] 考研调剂 +8 小蜡新笔 2026-03-26 8/400 2026-03-26 16:18 by dick_runner
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 材料求调剂 +4 .m.. 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:30 by peike
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 321求调剂 +3 璞玉~~ 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:07 by Zhanglab-TJU
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
信息提示
请填处理意见