24小时热门版块排行榜    

查看: 6364  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Mingle_Su

银虫 (小有名气)

[求助] CoIP/蛋白互作|| 阴性对照杂出条带 ||FLAG HA Triton 洗涤 原生质体瞬时表达 已有2人参与

阴性对照的也被沉淀下来了,一周的实验就这样废了,请各位资深朋友帮分析下原因。每个样品用了20ul带FLAG抗体的磁珠(sigma),孵育结合后用0.1%的Triton 100 洗涤4次,最后用50mM的Tris-HCl pH=7.5 洗涤,每次洗涤均用1mL的buffer。个人觉得应该不是珠子没洗干净,另外考虑蛋白直接结合磁珠,两个完全不相关的蛋白都可以结合磁珠更加不可能。只能想到以上两个比较直接原因,请各位高手指教。 具体问题见下图,谢谢!

CoIP/蛋白互作|| 阴性对照杂出条带 ||FLAG HA Triton 洗涤 原生质体瞬时表达
CoIP
回复此楼
Succeed
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mofashishe

铜虫 (小有名气)

用结合ha的凝胶,还有你是不是把抗体搞错了啊。

发自小木虫Android客户端
8楼2015-12-13 23:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

陈爱中

新虫 (小有名气)

反正你都过表达的,为什么不直接做体外pull-down?
2楼2015-12-13 11:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mofashishe

铜虫 (小有名气)

e81那个样品和flag抗体有交叉反应?

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-13 11:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mingle_Su

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-12-13 11:19:35
反正你都过表达的,为什么不直接做体外pull-down?

原生质体过表达和原核过表达差挺多的。其实我同时在做酵母双杂交,BiFC 和共定位的实验,哈哈。
Succeed
4楼2015-12-13 13:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +16 Lanmanbaby 2026-08-09 26/1300 2026-08-11 17:16 by 天神眷顾
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 yPv6ndDtiRxQ 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:15 by CLKTSgjM0Uqj
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-11 16:57 by Ai19911123
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +7 Tide man 2026-08-10 8/400 2026-08-11 15:49 by 铁帽子农民
[基金申请] 帮忙看看fileCode +6 wwncly 2026-08-10 12/600 2026-08-11 13:01 by wwncly
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
请填处理意见