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潇湘、西瓜匠

新虫 (初入文坛)

[求助] 我pcr之后跑胶的条带模糊不清,但是能看出有条带,Marker也一样的? 已有5人参与

如题,大家看下我的胶图,帮忙分析下原因。

我pcr之后跑胶的条带模糊不清,但是能看出有条带,Marker也一样的?


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木有西瓜的冬天~~~
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 潇湘、西瓜匠 at 2015-12-10 12:53:55
我换了电泳液,90伏,2%的胶,上午跑了一遍,这次清楚些了,但是搞不懂最下面那一排条带是什么,我的结果就是比100marker高一点和低一点的条带,最下面的肯定不是94bp的

...

你拍胶太不认真了,即便你拍得不认真,也应该把图截截好再来发
按你的分析可以怀疑primer dimer,Fermentas有比100 bp还小的DNA marker
看你的需求,如果能看见你要的两条带就算行了,这样的条件也还可以,想搞个好看的图可以走PAGE
12楼2015-12-10 14:13:40
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樊雪1994

金虫 (小有名气)

2楼2015-12-10 00:12:11
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Marker也跑成这样说明不仅是扩增产物的问题,而是电泳过程出问题了。
比如是否恒压或恒流?
电泳胶是否配制正确?
胶染还是泡染?如果泡染,是否时间太长?

PS:这样跑电泳有点浪费……
3楼2015-12-10 09:02:41
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371522029

金虫 (正式写手)

小鱼儿

你這個pcr基本上是引物二聚体的感觉。我估计更电泳缓冲液体有关。最好是新的,胶片也要用缓冲液配置。另外上样也要特别的细心。电泳电压不要太大或者太小,注意恒压。

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4楼2015-12-10 09:09:19
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