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远丽123

金虫 (小有名气)

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[求助] 同源重组的方法敲除目的基因已有4人参与

我要对一个基因进行敲除，是利用同源重组的方法敲除目的基因，将两端同源臂搭起来构建重组质粒，后来送去测序发现了有一个碱基错了可能发生了点突变请问各位大神我还可以用这个用这个重组质粒进行下面实验吗只是一个碱基错了应该不会有太大影响吧

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基因敲除第一步同源重组后用上下游基因的两头引物同时扩增怎么只出现了一个条带已经有5人回复

1楼 2015-12-09 12:43:09

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shengliding

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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远丽123: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-12-17 21:30:06

用于基因敲除没问题。你关注的是目的基因去除，一个碱基不会影响同源重组；一般情况下，你敲除的基因与其临近的基因应该有一定的距离，其上游和下游片段（也就1kb吧）应该只关系到目标基因，那单碱基的改变不应影响其它基因。重组后，目标基因被筛选标记基因替换掉，也不会影响筛选标记基因。我做的基因敲除还没测过上下游片段的序列。