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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 同源重组的方法敲除目的基因
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远丽123

金虫 (小有名气)

[求助] 同源重组的方法敲除目的基因 已有4人参与

我要对一个基因进行敲除，是利用同源重组的方法敲除目的基因，将两端同源臂搭起来构建重组质粒，后来送去测序 发现了有一个碱基错了 可能发生了点突变 请问各位大神  我还可以用这个用这个重组质粒进行下面实验吗 只是一个碱基错了 应该不会有太大影响吧

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1楼 2015-12-09 12:43:09
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远丽123

金虫 (小有名气)
自己顶一下！！

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2楼2015-12-09 12:43:33
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ego369

木虫 (正式写手)
那要看你这个碱基在哪

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3楼2015-12-09 13:36:59
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ljrenweicong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
远丽123: 金币+2, ★有帮助 2015-12-09 18:04:17
最好不要用了 原则上是一个碱基都不能突变，因为在发生单、双交换过程中还有可能发生自身突变
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4楼2015-12-09 14:47:54
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远丽123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ego369 at 2015-12-09 13:36:59
那要看你这个碱基在哪

在被敲除基因的下游
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5楼2015-12-09 18:03:17
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ego369

木虫 (正式写手)
在下游会影响下游基因的表达不

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6楼2015-12-09 21:21:06
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shengliding

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
远丽123: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-12-17 21:30:06
用于基因敲除没问题。你关注的是目的基因去除，一个碱基不会影响同源重组；一般情况下，你敲除的基因与其临近的基因应该有一定的距离，其上游和下游片段（也就1kb吧）应该只关系到目标基因，那单碱基的改变不应影响其它基因。重组后，目标基因被筛选标记基因替换掉，也不会影响筛选标记基因。我做的基因敲除还没测过上下游片段的序列。
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7楼2015-12-10 08:32:02
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远丽123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ego369 at 2015-12-09 21:21:06
在下游会影响下游基因的表达不

我不知道会不会影响呢

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8楼2015-12-10 10:48:15
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远丽123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by shengliding at 2015-12-10 08:32:02
用于基因敲除没问题。你关注的是目的基因去除，一个碱基不会影响同源重组；一般情况下，你敲除的基因与其临近的基因应该有一定的距离，其上游和下游片段（也就1kb吧）应该只关系到目标基因，那单碱基的改变不应影响 ...

多谢你的回答 对我很有用 测序出来的下游与我原序列相比多了一个碱基 我是担心会不会影响到下面一个基因的表达 应该不会有太大影响吧

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9楼2015-12-10 10:50:35
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 远丽123 at 2015-12-10 10:50:35
多谢你的回答 对我很有用 测序出来的下游与我原序列相比多了一个碱基 我是担心会不会影响到下面一个基因的表达 应该不会有太大影响吧
...

如果 是用于下游表达，剩余的碱基有错误的那么最好是重新构建
本人论文期间是吃过亏的，非常浪费时间，出了问题排查问题得花不少时间
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10楼2015-12-11 08:23:11
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