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srr1990

新虫 (初入文坛)

[求助] 酿酒酵母破壁 已有4人参与

请问各位,有没有用酿酒酵母系统做蛋白表达的?我的是胞内表达,需要破壁,之前查过很多资料,用超声波也试过,破不开。之后用的是酸洗玻璃珠,感觉效果还不错。我不知道小虫子们都是怎么破壁的,因为要测酶活,所以还要保持蛋白的酶活性。我想知道你们都是怎么知道破壁完全的?难道都是破完后用SDS-PAGE检测看是否有条带?
还有,我破壁都是用实验室一般的涡旋振荡器,也就震荡10min左右,都是手动的,而且量也很少,每次破完上清也就200-300ul左右,怕再多破碎效果不好。请教各位,你们有没有比较好的方法?
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397608492

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-12-08 09:53:34
我们实验室做毕赤酵母蛋白表达,一般就是用超声破碎的
你的蛋白表达量是不是很大啊,导致的很难破碎?

想咨询一下超声破碎的条件和机器型号?毕赤酵母不是超声破碎效果很差的吗?

发自小木虫Android客户端
11楼2015-12-08 23:57:18
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371522029

金虫 (正式写手)

小鱼儿

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
srr1990: 金币+1 2015-12-09 23:10:17
液氮碾磨当然是最好的。没有的话,我们一般用珠摩仪
2楼2015-12-08 00:16:49
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
2楼: Originally posted by 371522029 at 2015-12-08 00:16:49
液氮碾磨当然是最好的。没有的话,我们一般用珠摩仪

用lyticase消化下,效果好

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-08 07:31:35
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gnice

金虫 (正式写手)

4楼2015-12-08 07:33:39
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