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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酿酒酵母破壁
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srr1990

新虫 (初入文坛)

[求助] 酿酒酵母破壁 已有4人参与

请问各位，有没有用酿酒酵母系统做蛋白表达的？我的是胞内表达，需要破壁，之前查过很多资料，用超声波也试过，破不开。之后用的是酸洗玻璃珠，感觉效果还不错。我不知道小虫子们都是怎么破壁的，因为要测酶活，所以还要保持蛋白的酶活性。我想知道你们都是怎么知道破壁完全的？难道都是破完后用SDS-PAGE检测看是否有条带？
还有，我破壁都是用实验室一般的涡旋振荡器，也就震荡10min左右，都是手动的，而且量也很少，每次破完上清也就200-300ul左右，怕再多破碎效果不好。请教各位，你们有没有比较好的方法？
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严谨认真，阳光向上、执着追求自己的科研小世界
1楼 2015-12-07 22:39:04
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jyifan

木虫 (小有名气)
工业上就是匀浆机加板式过滤

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勤勉、坚持
8楼2015-12-08 08:20:01
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srr1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-12-08 09:53:34
我们实验室做毕赤酵母蛋白表达，一般就是用超声破碎的
你的蛋白表达量是不是很大啊，导致的很难破碎？

表达量不大，很低。就是觉得用涡漩振荡器挺累人的，每次破出来就那么一点，手一直都随着震荡抖动着！胳膊都酸
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严谨认真，阳光向上、执着追求自己的科研小世界
10楼2015-12-08 23:55:02
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371522029

金虫 (正式写手)

小鱼儿

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
srr1990: 金币+1 2015-12-09 23:10:17
液氮碾磨当然是最好的。没有的话，我们一般用珠摩仪
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2楼2015-12-08 00:16:49
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 371522029 at 2015-12-08 00:16:49
液氮碾磨当然是最好的。没有的话，我们一般用珠摩仪

用lyticase消化下，效果好

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3楼2015-12-08 07:31:35
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gnice

金虫 (正式写手)
溶菌酶

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4楼2015-12-08 07:33:39
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油桃面包

新虫 (初入文坛)
蜗牛酶和纤维素酶

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5楼2015-12-08 07:39:58
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397608492

新虫 (小有名气)
少量处理的话液氮研磨和珠磨都可以，大量的话高压匀浆机

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6楼2015-12-08 07:57:57
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jyifan

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
srr1990: 金币+1 2015-12-09 23:12:28
我说一个不一样的，冷冻干燥，保留细胞活性，还可以接着养，但细胞通透性增加，里面的酶可以释放出来

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勤勉、坚持
7楼2015-12-08 08:06:48
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室做毕赤酵母蛋白表达，一般就是用超声破碎的
你的蛋白表达量是不是很大啊，导致的很难破碎？
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
9楼2015-12-08 09:53:34
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