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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 凝胶回收
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candy曼

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 凝胶回收 已有4人参与

从载体质粒上P下目的基因，条带也很亮，但是凝胶回收的时候却总是浓度很低，请教各位大神，是什么原因，我用的是biowest regular agarose G-10的凝胶，这种凝胶适合凝胶回收吗？
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1楼 2015-12-06 12:05:24
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马玛丽

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的什么胶回收试剂盒？

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2楼2015-12-06 12:09:13
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candy曼

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 马玛丽 at 2015-12-06 12:09:13
用的什么胶回收试剂盒？

天根
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3楼2015-12-06 12:10:52
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candy曼

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by candy曼 at 2015-12-06 12:10:52
天根

生工的也用了但是也是很低
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4楼2015-12-06 12:12:56
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candy曼

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 马玛丽 at 2015-12-06 12:09:13
用的什么胶回收试剂盒？

天根的，生工的也用了，也是很低
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5楼2015-12-06 12:14:02
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匿名

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6楼2015-12-06 12:44:56
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zhuec

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一定要等到胶块完全溶解再过柱子，可以过两次柱子，每次静置时间长一点来提高回收率

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7楼2015-12-06 14:04:19
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371522029

金虫 (正式写手)

小鱼儿

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
凝胶回收，首先要切胶。切入的胶量越小，浓度越大越好。
首先我建议你用大连宝生的胶回收试剂盒。
用大梳子做胶，将全部样品大概至少要4管PCR产物的样品合并上样。胶配硬一点儿，我们是2%的胶电泳，电泳电压小一点儿，大概为50mv；电泳时间久一点儿，估计个把小时。然后晚上关灯，用手持紫外灯切胶。切下的胶越细越好，越少垃圾越好。然后用胶回收试剂盒做回收，正常操作，效果很好。你的浓度低，就是量不够，切得胶太多。
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8楼2015-12-07 01:31:54
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匿名

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9楼2015-12-07 05:07:14
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wjasaa

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基因长度较小的话可以加入适量异丙醇，洗脱液先预热一下效果会更好。比较容易出问题的地方一般是凝胶没有彻底溶解，或者wash buffer忘记加乙醇。
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WWW.ABMGOOD.COM
10楼2015-12-07 12:15:25
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