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cgkbhf

新虫 (初入文坛)

[求助] ELISA提高抗原抗体特异性结合 已有1人参与

请教各位大神!
我最近在做ELISA,先在酶标板包被抗原,然后加入少量能够和抗原特异性结合的酶标抗体(按理论计算抗原摩尔量远大于酶标抗体),发现就算是怎么增大包被抗原量,酶标抗体(始终定量)最多只能减少30%(通过测反应前后OD值确定),感觉抗原饱和了,为什么会出现这种情况?我想至少结合60%,该怎么做?我只有5金币了,各位大神帮忙分析一下。感激不尽!!!
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cgkbhf

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-06 10:22:31
应该在酶标板,抗原上找找原因,,能找出方法测试抗原包被的情况吗

我之后在实验过后的板子上继续加入更大浓度的酶标抗体反应1h,后测酶标抗体反应前后的OD值,抗体有减少,而且测酶标孔OD值也有增加,我觉得我包被的抗原确实增加了,但是现在我需要将较低浓度的酶标抗体与包被抗原结合,发现增加包被抗原,酶标抗体到一定程度不减少。
3楼2015-12-06 20:15:09
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

应该在酶标板,抗原上找找原因,,能找出方法测试抗原包被的情况吗
努力的小蜜蜂
2楼2015-12-06 10:22:31
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cgkbhf: 金币+5, ★★★很有帮助, 有帮助,谢谢了!! 2015-12-08 19:05:02
不知道题主设计这个实验的目的是什么?是进行抗体的定量还是进行抗原和抗体结合活性的测量?
看样子像是想进行抗原抗体结合活性的测量,这个实验的设计方案应该是包被少量的抗原,抗体做梯度稀释,然后OD值进行四参数拟合,理论上在抗体浓度较高时几个点,信号会在平台期,后面会随浓度下降,抗体的信号也会下降,结合60%的点这个时候是能找到的。
抗原要是过量包被的话,定量的抗体都结合上去了,信号当然不会有太大变化。

注意OD值读数一般仪器的检测极限在3.5-4之间,如果信号在这个范围内,信号值可能就不在线性范围了,信号不可信,也就是说信号不能真实反馈结合的强弱了
4楼2015-12-06 21:02:49
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cgkbhf

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-06 21:02:49
不知道题主设计这个实验的目的是什么?是进行抗体的定量还是进行抗原和抗体结合活性的测量?
看样子像是想进行抗原抗体结合活性的测量,这个实验的设计方案应该是包被少量的抗原,抗体做梯度稀释,然后OD值进行四参 ...

非常感谢您的回答,这是我实验的一部分,出了点问题。我现在的问题是要固定量酶标抗体全部被抗原结合,我在找抗原的量(抗体的量是不能变的),所以我设置了不同抗原浓度梯度去和这固定量的抗体反应,但是不管怎么增加抗原量,只能结合这定量抗体的30%,不能够全部结合。请问这是怎么回事?
5楼2015-12-06 22:03:05
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