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ELISA提高抗原抗体特异性结合 已有1人参与
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请教各位大神! 我最近在做ELISA,先在酶标板包被抗原,然后加入少量能够和抗原特异性结合的酶标抗体(按理论计算抗原摩尔量远大于酶标抗体),发现就算是怎么增大包被抗原量,酶标抗体(始终定量)最多只能减少30%(通过测反应前后OD值确定),感觉抗原饱和了,为什么会出现这种情况?我想至少结合60%,该怎么做?我只有5金币了,各位大神帮忙分析一下。感激不尽!!! |
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3楼2015-12-06 20:15:09

2楼2015-12-06 10:22:31
yyy0305
至尊木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与,应助指数 +1
cgkbhf: 金币+5, ★★★很有帮助, 有帮助,谢谢了!! 2015-12-08 19:05:02
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不知道题主设计这个实验的目的是什么?是进行抗体的定量还是进行抗原和抗体结合活性的测量? 看样子像是想进行抗原抗体结合活性的测量,这个实验的设计方案应该是包被少量的抗原,抗体做梯度稀释,然后OD值进行四参数拟合,理论上在抗体浓度较高时几个点,信号会在平台期,后面会随浓度下降,抗体的信号也会下降,结合60%的点这个时候是能找到的。 抗原要是过量包被的话,定量的抗体都结合上去了,信号当然不会有太大变化。 注意OD值读数一般仪器的检测极限在3.5-4之间,如果信号在这个范围内,信号值可能就不在线性范围了,信号不可信,也就是说信号不能真实反馈结合的强弱了 |
4楼2015-12-06 21:02:49
5楼2015-12-06 22:03:05













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