应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
52/1返回列表
查看: 1748  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liling0601

铜虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有3人参与

我通过高保真酶扩的两个4000+bp的序列，但是怎么都连接不到PGBKT7，或者Pcambia1301的载体上，麻烦有经验的各位给点建议，我用的是takara的T4连接酶，16度16小时或者24小时 4度过夜或者3天都连过，就是连不上，连上的菌液验证不出来，酶切多了个三千的条带或者是提出的质粒木有条带
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-30 11:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjqhades

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
19楼2015-12-03 11:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我只能说如果片段长了不好连接到载体上，可以在片段中部寻个酶切位点分开两段依次连接，我只是提供个思路，具体实验流程还要好好谋划谋划，我没有连过这么长的。
赞一下 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
2楼2015-11-30 11:51:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Demon黄

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就如楼上所说的，你得看你扩增的片段有没有和质粒载体上一样的酶切位点。一般粘端更好连接。或者你可以给你的目的片段3‘、5’端加上酶切位点，然后用相同酶将质粒载体酶切一下，然后再连（给目的片段加酶切位点时，关键是看质粒载体上有没有这两个酶的酶切位点）。
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-30 18:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liling0601

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Demon黄 at 2015-11-30 18:40:52
就如楼上所说的，你得看你扩增的片段有没有和质粒载体上一样的酶切位点。一般粘端更好连接。或者你可以给你的目的片段3‘、5’端加上酶切位点，然后用相同酶将质粒载体酶切一下，然后再连（给目的片段加酶切位点时， ...

我的片段两端都加好酶切位点的，跟载体上一样的
赞一下 回复此楼
4楼2015-12-01 13:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕318求调剂 +10 February_Feb 2026-03-01 12/600 2026-03-01 23:34 by L135790
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭