应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 1793  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liling0601

铜虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有3人参与

我通过高保真酶扩的两个4000+bp的序列，但是怎么都连接不到PGBKT7，或者Pcambia1301的载体上，麻烦有经验的各位给点建议，我用的是takara的T4连接酶，16度16小时或者24小时 4度过夜或者3天都连过，就是连不上，连上的菌液验证不出来，酶切多了个三千的条带或者是提出的质粒木有条带
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-30 11:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yjqhades

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
14楼2015-12-02 13:58:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我只能说如果片段长了不好连接到载体上，可以在片段中部寻个酶切位点分开两段依次连接，我只是提供个思路，具体实验流程还要好好谋划谋划，我没有连过这么长的。
赞一下 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
2楼2015-11-30 11:51:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Demon黄

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就如楼上所说的，你得看你扩增的片段有没有和质粒载体上一样的酶切位点。一般粘端更好连接。或者你可以给你的目的片段3‘、5’端加上酶切位点，然后用相同酶将质粒载体酶切一下，然后再连（给目的片段加酶切位点时，关键是看质粒载体上有没有这两个酶的酶切位点）。
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-30 18:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liling0601

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Demon黄 at 2015-11-30 18:40:52
就如楼上所说的，你得看你扩增的片段有没有和质粒载体上一样的酶切位点。一般粘端更好连接。或者你可以给你的目的片段3‘、5’端加上酶切位点，然后用相同酶将质粒载体酶切一下，然后再连（给目的片段加酶切位点时， ...

我的片段两端都加好酶切位点的，跟载体上一样的
赞一下 回复此楼
4楼2015-12-01 13:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 319求调剂 +17 太容易1018 2026-04-01 17/850 2026-04-03 09:17 by zhouxiaoyu
[考研] 312求调剂 +4 赊月色 2026-04-02 5/250 2026-04-03 08:21 by fangshan711
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +33 洛神哥哥 2026-03-31 35/1750 2026-04-03 08:21 by 偏爱1568
[考研] 338求调剂，一志愿能源动力，外语是日语203 +4 zzz，，r 2026-04-02 4/200 2026-04-03 07:42 by cc8418
[考研] 学硕机械工程303求调剂 +5 无名所以叫吴明 2026-03-30 5/250 2026-04-02 20:12 by hengsmith
[论文投稿] chinese chemical letters英文版投稿求助 120+4 Yishengeryi 2026-03-30 6/300 2026-04-02 17:19 by Yishengeryi
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +26 材料学257求调剂 2026-03-28 27/1350 2026-04-02 15:15 by chyhaha
[考研] 0856初试324分求调剂 +6 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 11:42 by 星空星月
[考研] 265求调剂11408 +4 刘小鹿lu 2026-03-27 4/200 2026-04-02 11:27 by guyan1000
[考研] 0710生物学336分求调剂 +3 kiyy 2026-04-01 3/150 2026-04-02 10:54 by w虫虫123
[考研] 【求调剂】新能源材料本科，一志愿211，初试321 +6 求调剂学校， 2026-04-02 6/300 2026-04-02 09:41 by 晴空210210
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-01 21:48 by chyhaha
[考研] 303分 0807学硕求调剂 +3 TYC3632 2026-04-01 3/150 2026-04-01 19:24 by lwk2004
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-27 14/700 2026-04-01 15:58 by yanflower7133
[考研] 267求调剂 +13 uiybh 2026-03-31 13/650 2026-04-01 10:25 by 探123
[考研] 材料工程085601数二英一335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-03-31 19:07 by Wang200018
[考研] 考研调剂求助 +7 13287130938 2026-03-31 7/350 2026-03-31 16:39 by 690616278
[考研] 286求调剂 +6 Faune 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:37 by jp9609
[考研] 085404 22408 315分 +5 zhuangyan123 2026-03-31 6/300 2026-03-31 13:48 by limeifeng
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭