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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酵母菌的菌落PCR验证
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人车

木虫 (正式写手)

[求助] 酵母菌的菌落PCR验证 已有1人参与

这个是我重组酵母的菌落PCR结果 第一条道是直接用含有目的基因的质粒进行的PCR，其他泳道都是用的挑选的重组子进行的菌落PCR
我用的是煮-冻-煮法进行的基因组提取，用的引物是5 AOX1和3AOX1，经过电泳发现，菌落PCR中除了有目标大小的条带外，在500bp左右处出现了一个ppic9k质粒空载的条带
这个就有点想不太通了，希望各位大牛指教，谢谢了~

酵母菌的菌落PCR验证
菌落PCR
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1楼 2015-11-24 15:57:47
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632362481

铜虫 (小有名气)
明显模板加多了。
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。。。
2楼2015-11-24 15:59:27
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人车

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 632362481 at 2015-11-24 15:59:27
明显模板加多了。

您好，能问以下 如何看出来模版加多的呢？  第一次做没什么经验
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3楼2015-11-24 16:12:46
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632362481

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 人车 at 2015-11-24 16:12:46
您好，能问以下 如何看出来模版加多的呢？  第一次做没什么经验...

sorry,我看错了，我觉得是不是质粒不纯造成的啊？
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。。。
4楼2015-11-24 16:34:10
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yangdl1023

木虫 (正式写手)

Panggong
the control without plasmid has a band in PCR? and in our lab we use a kit for whole cell PCR, it is very sample and not need to extract DNA
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5楼2015-11-24 17:10:42
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人车

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 632362481 at 2015-11-24 16:34:10
sorry,我看错了，我觉得是不是质粒不纯造成的啊？...

你说的是那个质粒不纯呢？ 我第一个是质粒PCR的 其他的都是菌落PCR
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6楼2015-11-24 22:34:20
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人车

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yangdl1023 at 2015-11-24 17:10:42
the control without plasmid has a band in PCR? and in our lab we use a kit for whole cell PCR, it is very sample and not need to extract DNA

这就是一种快速检测的方法 不过就是想知道500bp左右的那个条带是为什么
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7楼2015-11-24 22:35:53
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沐枫之城

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议楼主以后电泳时候加Marker并且一定要加阳性和阴性对照，还有尽量让图片清晰一点。
根据这个图不明白楼主什么意思。
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8楼2015-11-25 20:00:27
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wyfdgg

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yangdl1023 at 2015-11-24 17:10:42
the control without plasmid has a band in PCR? and in our lab we use a kit for whole cell PCR, it is very sample and not need to extract DNA

can you tell me where can I buy  the kits
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9楼2015-11-30 17:05:33
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落雪6

铁杆木虫 (正式写手)

小兵
看看说明书就明白了，用通用引物本来就应该扩出的目的条带本应该比你的目的条带大490多，空载体自然就有一条490多的条带了，建议好好看看毕赤酵母表达手册！

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10楼2015-11-30 17:41:12
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