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蜗牛先生吃葱

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白的原核表达 已有3人参与

各位同学好,我构建了一个pet21b的原核表达载体,成功构建后通过了PCR和酶切鉴定,并测序无误,经过热激法将构建好的pet21b 的载体质粒转入表达菌株 E.coli BL21(DE3),通过IPTG诱导目的蛋白表达,但是不管我怎么尝试表达条件(温度,IPTG浓度,转速),都不能得到想要的目的蛋白,想知道在诱导表达过程中有哪些我没注意到的地方?

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蜗牛先生学生物
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从菌种开始赛选,首先提质粒测序看你的序列有没有问题,可以尝试换个载体试试。还有诱导剂添加时间,这个也是很关键的。祝顺利
3楼2015-11-23 14:04:37
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果诱导条件已经尝试过很多,都不表达,也许该载体或菌种并不适合该蛋白表达,可以尝试更换载体或菌种
2楼2015-11-23 09:41:47
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zouzhengzhong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

培养时加点氯霉素,同时尝试不同OD值时加入IPTG,诱导不同时间,温度尽量低温。
4楼2015-11-25 08:40:20
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冰城'若雪

新虫 (初入文坛)

你好,请问你现在解决了这个问题?

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5楼2015-12-09 10:54:18
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