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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 蛋白的原核表达
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蜗牛先生吃葱

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白的原核表达 已有3人参与

各位同学好，我构建了一个pet21b的原核表达载体，成功构建后通过了PCR和酶切鉴定，并测序无误，经过热激法将构建好的pet21b 的载体质粒转入表达菌株 E.coli BL21（DE3），通过IPTG诱导目的蛋白表达，但是不管我怎么尝试表达条件（温度，IPTG浓度，转速），都不能得到想要的目的蛋白，想知道在诱导表达过程中有哪些我没注意到的地方？

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蜗牛先生学生物
1楼 2015-11-20 19:27:49
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果诱导条件已经尝试过很多，都不表达，也许该载体或菌种并不适合该蛋白表达，可以尝试更换载体或菌种
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2楼2015-11-23 09:41:47
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从菌种开始赛选，首先提质粒测序看你的序列有没有问题，可以尝试换个载体试试。还有诱导剂添加时间，这个也是很关键的。祝顺利
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3楼2015-11-23 14:04:37
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zouzhengzhong

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

培养时加点氯霉素，同时尝试不同OD值时加入IPTG，诱导不同时间，温度尽量低温。
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4楼2015-11-25 08:40:20
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冰城＇若雪

新虫 (初入文坛)
你好，请问你现在解决了这个问题？

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5楼2015-12-09 10:54:18
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
优化密码子把，不然不好做

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6楼2015-12-09 13:38:44
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