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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 多次pcr均无法获得大量的目的
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李豆豆416

铁虫 (小有名气)

[交流] 多次pcr均无法获得大量的目的 已有20人参与

有一段基因序列，始终pcr不出来，模版没有问题，引物换了好几对，也做过梯度，可是条带很暗，无法纯化，这是什么原因？请大家赐教

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1楼 2015-11-17 15:58:06
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
顶～我也遇到了同样问题

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2楼2015-11-17 16:02:46
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xushiqi001

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换酶。你别的PCR有问题么。

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3楼2015-11-17 16:08:56
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李豆豆416

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xushiqi001 at 2015-11-17 16:08:56
换酶。你别的PCR有问题么。

酶换过了，用extaq，和lftaq都不行

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4楼2015-11-17 16:20:55
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xushiqi001

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看看引物是不是降解了，如果不是，适当增加循环数，调整退火温度。

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5楼2015-11-17 16:34:32
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51mimi

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先用低温（40度左右）做10个循环，然后用你预测的最适温度（也可梯度）再做25个循环，试试。

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6楼2015-11-17 16:43:24
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wyfdgg

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的模板是什么，如果是基因组DNA的话，一般冻融过几次就不能用了。如果是质粒的话要稀释一定的倍数。
还有你说的条带很暗是只有目的条带还是有杂带？
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7楼2015-11-18 10:27:10
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李豆豆416

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wyfdgg at 2015-11-18 10:27:10
你的模板是什么，如果是基因组DNA的话，一般冻融过几次就不能用了。如果是质粒的话要稀释一定的倍数。
还有你说的条带很暗是只有目的条带还是有杂带？

只有目的条带

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8楼2015-11-18 10:36:50
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wyfdgg

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 李豆豆416 at 2015-11-18 10:36:50
只有目的条带
...

模板是质粒还是？
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9楼2015-11-18 10:50:54
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wyfdgg

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 李豆豆416 at 2015-11-18 10:36:50
只有目的条带
...

如果是只有目的条带的话，说明你的模板量可能太少了。
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10楼2015-11-18 13:12:47
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