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青苹果QT

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的目的片段有多大呀?
21楼2015-11-19 09:42:11
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瑷洱yd

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你可以试试吧把第一次的pcr产物稀释50倍,再用之前的引物跑一次pcr(我之前和你一样的情况,这样做之后就出来很亮的带了),祝成功

发自小木虫Android客户端
22楼2015-11-19 11:22:57
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kun2199

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
基因在提的那个组织中表达量如何,是不是太低了,换一个别的组织试试,还有CDNA的质量如何,都是要考虑的,两个引物的退火温度差异。
23楼2015-11-19 12:56:47
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李豆豆416

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 青苹果QT at 2015-11-19 09:42:11
你的目的片段有多大呀?

600bp

发自小木虫IOS客户端
24楼2015-11-19 13:45:19
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
循环数增大几个试试看
25楼2015-11-19 14:38:29
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青苹果QT

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
24楼: Originally posted by 李豆豆416 at 2015-11-19 13:45:19
600bp
...

哦哦,那不大呀,应该很好p才对。是不是模板不好呀?你换个别的基因,用同样的条件pcr试试。看看是不是条带也这样,如果也是这样的话那应该是模板不好
26楼2015-11-20 08:59:30
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hihe99

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试试把PCR仪的降温速率调低吧,一般是3-4℃/s,调到0.5,调变性到退火、退火到延伸的升降温过程
27楼2015-11-20 11:15:22
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hihe99

银虫 (小有名气)

主要是变性到退火的过程
28楼2015-11-20 11:17:21
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科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
20楼: Originally posted by 李豆豆416 at 2015-11-19 09:24:43
但是,引物的tm值还不到50
...

增加引物长度
生物科学
29楼2015-11-20 19:16:21
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wenzhipeng

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
确定模板没问题?还是说提DNA的时候会不会有什么抑制PCR反应的东西?比如我们常接触外周血,我们用的抗凝管就不能是肝素抗凝的
30楼2015-11-20 21:23:52
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