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6827089

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以回收暗的条带当模板,再pcr

发自小木虫Android客户端
11楼2015-11-18 13:14:28
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科学小覃

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有些复杂模版的基因很难变性,可加入变性促进剂如DMSO,或提高变性温度,98度30秒,另外设计退火温度高一点的引物,最好60以上。
生物科学
12楼2015-11-18 13:30:20
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骑驴诗人

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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1楼: Originally posted by 李豆豆416 at 2015-11-17 15:58:06
有一段基因序列,始终pcr不出来,模版没有问题,引物换了好几对,也做过梯度,可是条带很暗,无法纯化,这是什么原因?请大家赐教

加一下循环或模版量试一下

发自小木虫IOS客户端
13楼2015-11-18 13:36:36
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李豆豆416

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wyfdgg at 2015-11-18 10:50:54
模板是质粒还是?...

是cDNA

发自小木虫IOS客户端
14楼2015-11-18 14:15:56
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李豆豆416

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 6827089 at 2015-11-18 13:14:28
可以回收暗的条带当模板,再pcr

试过了,出现拖带很严重

发自小木虫IOS客户端
15楼2015-11-18 14:17:21
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李豆豆416

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-11-18 13:30:20
有些复杂模版的基因很难变性,可加入变性促进剂如DMSO,或提高变性温度,98度30秒,另外设计退火温度高一点的引物,最好60以上。

基因中的AT含量很高

发自小木虫IOS客户端
16楼2015-11-18 14:17:57
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valkeyyu

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.引物和模板的同源性有多大
2.PCR反应试剂是否正常工作
3.引物本身的立体结构,或者两条引物之间是否形成高次结构
4.仪器和反应条件
人间正道是沧桑
17楼2015-11-18 16:54:30
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甜甜的89

木虫 (小有名气)

切胶回收做模板
加油
18楼2015-11-18 16:58:46
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科学小覃

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by 李豆豆416 at 2015-11-18 14:17:57
基因中的AT含量很高
...

AT或GC不管哪个偏高都会容易链内互补的二级结构,所以要提高退火温度
生物科学
19楼2015-11-19 08:13:02
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李豆豆416

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-11-19 08:13:02
AT或GC不管哪个偏高都会容易链内互补的二级结构,所以要提高退火温度...

但是,引物的tm值还不到50

发自小木虫IOS客户端
20楼2015-11-19 09:24:43
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