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[交流]
测定NADPH依赖的酶活性的诡异现象，求解释
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测定原核表达，镍柱纯化得到的一个NADPH依赖的还原酶，在测定这个酶的活性的时候发现一个问题： 体系1：正常的反应体系，加入了酶，NADPH，底物，缓冲体系PH=6.0正常反应 体系2：对照组，加入煮死的酶，NADPH，底物，缓冲体系PH=6.0 体系3：加入了酶，NADPH，底物，缓冲体系PH=6.0，这一体系里不加底物 在333nm下测定反应30min的情况，结果很让人费解： 我们发现，正常反应体系反应催化底物减少的ABS值没有没加底物的体系3降低得多，换句话说，即使不加底物，单纯的酶与NADPH也可以一直反应并出现 ABS的持续下降？？ 自己排查了一些因素于是做了一些对照试验：1，体系2中煮死的酶的情况下是没有这一现象的，虽然消光系数有上下波动，但是是在可以接受的范围内。 2， 换用本实验室同种方法纯化的另一个酶（这个酶是裂解酶，没有还原活性，也不是NADPH依赖的），配置 体系3，测定结果和对照组类似（体系2的结果，也即是煮死酶的情况） 这样看来似乎可以排除是体系中其他溶液的问题，或者蛋白纯化过程引进的物质的影响，可是对于这一还原酶体系3里的情况该怎么解释，难道可以单纯的催化NADPH？ 求各位前辈各位大侠指教，谢谢啦 |
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