应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 测定NADPH依赖的酶活性的诡异现象，求解释
51/1返回列表
查看: 2201  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

策马入林

新虫 (小有名气)

[交流] 测定NADPH依赖的酶活性的诡异现象，求解释

测定原核表达，镍柱纯化得到的一个NADPH依赖的还原酶，在测定这个酶的活性的时候发现一个问题：
体系1：正常的反应体系，加入了酶，NADPH，底物，缓冲体系PH=6.0正常反应
体系2：对照组，加入煮死的酶，NADPH，底物，缓冲体系PH=6.0
体系3：加入了酶，NADPH，底物，缓冲体系PH=6.0，这一体系里不加底物
在333nm下测定反应30min的情况，结果很让人费解：
我们发现，正常反应体系反应催化底物减少的ABS值没有没加底物的体系3降低得多，换句话说，即使不加底物，单纯的酶与NADPH也可以一直反应并出现
ABS的持续下降？？
自己排查了一些因素于是做了一些对照试验：1，体系2中煮死的酶的情况下是没有这一现象的，虽然消光系数有上下波动，但是是在可以接受的范围内。
                                                                       2， 换用本实验室同种方法纯化的另一个酶（这个酶是裂解酶，没有还原活性，也不是NADPH依赖的），配置
                                                                              体系3，测定结果和对照组类似（体系2的结果，也即是煮死酶的情况）
这样看来似乎可以排除是体系中其他溶液的问题，或者蛋白纯化过程引进的物质的影响，可是对于这一还原酶体系3里的情况该怎么解释，难道可以单纯的催化NADPH？
求各位前辈各位大侠指教，谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-15 17:01:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

策马入林

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by CZ.HUANG at 2015-11-16 13:49:51
溶液是否澄清，油水是否乳化，静止状态，OD会变化
如果你这边验证体系无影响，那回到刚才的猜想：有的溶剂也会与酶反应，做为底物。
辅酶NADPH循环再生也是酶催化反应，正常酶催化反应，是两个酶偶联，但是这两个 ...

我现在也很好奇啊，溶液是澄清的，这个反应体系也是多篇文献报道的，不知道他们测定的时候有没有发现这个现象，现在我是很蛋疼。现在我在准备用液相来检测一下究竟有没有产物。
今天实验室和小老板讨论了下，也没什么结果，先等液相结果吧
赞一下 回复此楼
9楼2015-11-16 16:40:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

策马入林

新虫 (小有名气)
在线等等，好焦急
回复此楼
2楼2015-11-15 17:03:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

策马入林

新虫 (小有名气)
看来只有自己再顶一下了
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-15 17:16:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

CZ.HUANG

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
NADPH与溶剂，酶构建NADPH循环体系了吧？溶剂有可能是供氢体
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-16 09:17:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +4 西山十月 2026-08-09 6/300 2026-08-10 00:16 by liufeng0619
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +4 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-09 22:24 by otj2008
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭