| 查看: 1829 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
测定NADPH依赖的酶活性的诡异现象，求解释
|
|||
|
测定原核表达，镍柱纯化得到的一个NADPH依赖的还原酶，在测定这个酶的活性的时候发现一个问题： 体系1：正常的反应体系，加入了酶，NADPH，底物，缓冲体系PH=6.0正常反应 体系2：对照组，加入煮死的酶，NADPH，底物，缓冲体系PH=6.0 体系3：加入了酶，NADPH，底物，缓冲体系PH=6.0，这一体系里不加底物 在333nm下测定反应30min的情况，结果很让人费解： 我们发现，正常反应体系反应催化底物减少的ABS值没有没加底物的体系3降低得多，换句话说，即使不加底物，单纯的酶与NADPH也可以一直反应并出现 ABS的持续下降？？ 自己排查了一些因素于是做了一些对照试验：1，体系2中煮死的酶的情况下是没有这一现象的，虽然消光系数有上下波动，但是是在可以接受的范围内。 2， 换用本实验室同种方法纯化的另一个酶（这个酶是裂解酶，没有还原活性，也不是NADPH依赖的），配置 体系3，测定结果和对照组类似（体系2的结果，也即是煮死酶的情况） 这样看来似乎可以排除是体系中其他溶液的问题，或者蛋白纯化过程引进的物质的影响，可是对于这一还原酶体系3里的情况该怎么解释，难道可以单纯的催化NADPH？ 求各位前辈各位大侠指教，谢谢啦 |
回复此楼» 猜你喜欢
溴的反应液脱色
已经有6人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有8人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有7人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
-
推荐一本书
已经有10人回复
-
参与限项
已经有5人回复
-
有没有人能给点建议
已经有5人回复
-
假如你的研究生提出不合理要求
已经有12人回复
-
萌生出自己或许不适合搞科研的想法，现在跑or等等看？
已经有4人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有4人回复
9楼2015-11-16 16:40:04
2楼2015-11-15 17:03:17
3楼2015-11-15 17:16:56
4楼2015-11-16 09:17:40