| 查看: 2003 | 回复: 14 | |||
[交流]
关于酵母表达真菌蛋白的一些困惑！ 已有1人参与
|
|||
|
各位大神好！本人最近在用ppic9k酵母表达载体表达一个真菌里面的蛋白。测序结果已经显示我想要的蛋白序列已经成功连入了载体上，用MD平板也筛选到了his+的转化子，但是进行诱导后用镍柱纯化蛋白却没有得到我的目的蛋白，看来是没有成功表达！很是烦恼！现在怀疑是不是9k载体上面的AOX1启动子被破坏了，所以设计了引物去测序，但是结果还没有出来！很着急！然后看了篇文献上面写到作者在表达蛋白的时候去除了内含子以及信号肽序列，我之前表达的时候先去ncbi找到目的蛋白的cds序列，然后去除了信号肽，提RNA后扩增出不包含信号肽的目的序列。然后进行后续操作。请问各位大神，是不是由于没有考虑去除内含子的原因，所以我的目的蛋白才没有表达出来？跪谢！！ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有274人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 《读懂天然产物系列》-15-基因与化学联姻：破译生物合成70年未解之谜
已经有75人回复
shengliding
新虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 190.3
- 红花: 2
- 帖子: 251
- 在线: 43.6小时
- 虫号: 4195264
- 注册: 2015-11-04
- 专业: 植物病理学
8楼2015-11-15 00:01:50
2楼2015-11-13 17:32:17
 |
3楼2015-11-13 18:06:47
4楼2015-11-13 18:52:36
|
谢谢谢谢！我按照诱导手册来诱导的，也诱导了两遍，都没成功。还有就是，请为你知道如何去除内含子吗？因为我就直接从ncbi上面找到了该蛋白的cds编码区，里面也没有说明哪些是内含子，不知道有没有什么工具或者方法可以去除内含子？ 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2015-11-13 18:57:52
lwk5716
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 6993.4
- 散金: 181
- 红花: 3
- 帖子: 412
- 在线: 92.7小时
- 虫号: 2628224
- 注册: 2013-09-01
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
6楼2015-11-14 19:40:58
mzhyan
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 712 (博后)
- 金币: 37461.7
- 红花: 24
- 帖子: 45756
- 在线: 287.3小时
- 虫号: 1191620
- 注册: 2011-01-18
- 专业: 环境污染化学
7楼2015-11-14 21:06:42
9楼2015-11-16 09:21:16
|
在ncbi里面我选的cds区域，就是编码区。根据这个克隆然后表达。用的9K质粒。但是转化到酵母gs115里面之后提取酵母组基因，照理说用AOX1通用引物应该有两条条带，但是只有一条。难道gs115里面的AOX1基因组坏了？还有就是我诱导的时候发酵液好臭，难道染菌了？可以通过加抗生素amp之类的诱导吗？做WB也没有，看来是没表达出来，但是测序结果都显示正确！不知道为啥，难道要重新做吗？ 发自小木虫IOS客户端 |
10楼2015-11-16 12:15:27
投票:
30