| 查看: 1630 | 回复: 14 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
关于酵母表达真菌蛋白的一些困惑！ 已有1人参与
|
|||
|
各位大神好！本人最近在用ppic9k酵母表达载体表达一个真菌里面的蛋白。测序结果已经显示我想要的蛋白序列已经成功连入了载体上，用MD平板也筛选到了his+的转化子，但是进行诱导后用镍柱纯化蛋白却没有得到我的目的蛋白，看来是没有成功表达！很是烦恼！现在怀疑是不是9k载体上面的AOX1启动子被破坏了，所以设计了引物去测序，但是结果还没有出来！很着急！然后看了篇文献上面写到作者在表达蛋白的时候去除了内含子以及信号肽序列，我之前表达的时候先去ncbi找到目的蛋白的cds序列，然后去除了信号肽，提RNA后扩增出不包含信号肽的目的序列。然后进行后续操作。请问各位大神，是不是由于没有考虑去除内含子的原因，所以我的目的蛋白才没有表达出来？跪谢！！ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有201人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 《读懂天然产物系列》-15-基因与化学联姻：破译生物合成70年未解之谜
已经有75人回复
4楼2015-11-13 18:52:36
2楼2015-11-13 17:32:17
|
谢谢谢谢！我按照诱导手册来诱导的，也诱导了两遍，都没成功。还有就是，请为你知道如何去除内含子吗？因为我就直接从ncbi上面找到了该蛋白的cds编码区，里面也没有说明哪些是内含子，不知道有没有什么工具或者方法可以去除内含子？ 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2015-11-13 18:57:52
lwk5716
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 6993.4
- 散金: 181
- 红花: 3
- 帖子: 412
- 在线: 92.7小时
- 虫号: 2628224
- 注册: 2013-09-01
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
6楼2015-11-14 19:40:58
10