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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于酵母表达真菌蛋白的一些困惑！
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肉肉肉.

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mzhyan at 2015-11-14 21:06:42
blessing

thanks

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11楼2015-11-16 12:17:36
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shibiema
zf
12楼2015-11-16 12:22:46
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zhangyang16

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
肉肉肉.: 金币+5 2015-11-17 11:19:23
引用回帖:
10楼: Originally posted by 肉肉肉. at 2015-11-16 12:15:27
在ncbi里面我选的cds区域，就是编码区。根据这个克隆然后表达。用的9K质粒。但是转化到酵母gs115里面之后提取酵母组基因，照理说用AOX1通用引物应该有两条条带，但是只有一条。难道gs115里面的AOX1基因组坏了？还有 ...

发酵液臭应该是正常的，我也是将我的目的基因连接在9K载体上，然后转到GS115中，发酵液也很臭。最好不要加抗生素，不知道你表达的是什么。我表达的是酶，之前我的师兄加了抗生素，后来做抑菌实验的时候发现有活性，但是估计都是抗生素的抑菌效果，也曾经试过，透析处理抗生素透不掉。
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13楼2015-11-17 10:51:10
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肉肉肉.

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zhangyang16 at 2015-11-17 10:51:10
发酵液臭应该是正常的，我也是将我的目的基因连接在9K载体上，然后转到GS115中，发酵液也很臭。最好不要加抗生素，不知道你表达的是什么。我表达的是酶，之前我的师兄加了抗生素，后来做抑菌实验的时候发现有活性， ...

谢谢回复！请问你表达出来了吗？我表达的是一个简单的小蛋白而已，450bp左右，不知道为啥这么难，你也是用的bmmy吗？还有你做了pcr鉴定吗？

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14楼2015-11-17 11:26:25
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wyfdgg

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 肉肉肉. at 2015-11-16 12:15:27
在ncbi里面我选的cds区域，就是编码区。根据这个克隆然后表达。用的9K质粒。但是转化到酵母gs115里面之后提取酵母组基因，照理说用AOX1通用引物应该有两条条带，但是只有一条。难道gs115里面的AOX1基因组坏了？还有 ...

发酵液变臭的话，应该就是染菌了。你可以结合镜检看一下。能留一下你的联系方式吗，我最近也在做，和你遇到的问题差不多。
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15楼2015-11-17 13:52:10
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