应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于酵母表达真菌蛋白的一些困惑！
52/1返回列表
查看: 2006  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

肉肉肉.

铁虫 (小有名气)

[交流] 关于酵母表达真菌蛋白的一些困惑！ 已有1人参与

各位大神好！本人最近在用ppic9k酵母表达载体表达一个真菌里面的蛋白。测序结果已经显示我想要的蛋白序列已经成功连入了载体上，用MD平板也筛选到了his+的转化子，但是进行诱导后用镍柱纯化蛋白却没有得到我的目的蛋白，看来是没有成功表达！很是烦恼！现在怀疑是不是9k载体上面的AOX1启动子被破坏了，所以设计了引物去测序，但是结果还没有出来！很着急！然后看了篇文献上面写到作者在表达蛋白的时候去除了内含子以及信号肽序列，我之前表达的时候先去ncbi找到目的蛋白的cds序列，然后去除了信号肽，提RNA后扩增出不包含信号肽的目的序列。然后进行后续操作。请问各位大神，是不是由于没有考虑去除内含子的原因，所以我的目的蛋白才没有表达出来？跪谢！！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-11-13 17:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyang16

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
肉肉肉.: 金币+5 2015-11-17 11:19:23
引用回帖:
10楼: Originally posted by 肉肉肉. at 2015-11-16 12:15:27
在ncbi里面我选的cds区域，就是编码区。根据这个克隆然后表达。用的9K质粒。但是转化到酵母gs115里面之后提取酵母组基因，照理说用AOX1通用引物应该有两条条带，但是只有一条。难道gs115里面的AOX1基因组坏了？还有 ...

发酵液臭应该是正常的，我也是将我的目的基因连接在9K载体上，然后转到GS115中，发酵液也很臭。最好不要加抗生素，不知道你表达的是什么。我表达的是酶，之前我的师兄加了抗生素，后来做抑菌实验的时候发现有活性，但是估计都是抗生素的抑菌效果，也曾经试过，透析处理抗生素透不掉。
赞一下 回复此楼
13楼2015-11-17 10:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

肉肉肉.

铁虫 (小有名气)
救命啊！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2015-11-13 17:32:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fMssop

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
肉肉肉.: 金币+10 2015-11-13 18:55:16
我感觉更像是诱导环节出现问题，就是说不是载体的问题，而是就没表达出想要的蛋白质。关于酵母诱导方式，最好在查询相关文献。其次就是跨物种表达蛋白质，应该是都要求去掉内含子的，毕竟不同物种内含子的剪切方式不同，就算是成功表达也不一定就是所需要的蛋白质。
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-13 18:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肉肉肉.

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fMssop at 2015-11-13 18:52:36
我感觉更像是诱导环节出现问题，就是说不是载体的问题，而是就没表达出想要的蛋白质。关于酵母诱导方式，最好在查询相关文献。其次就是跨物种表达蛋白质，应该是都要求去掉内含子的，毕竟不同物种内含子的剪切方式不 ...

谢谢谢谢！我按照诱导手册来诱导的，也诱导了两遍，都没成功。还有就是，请为你知道如何去除内含子吗？因为我就直接从ncbi上面找到了该蛋白的cds编码区，里面也没有说明哪些是内含子，不知道有没有什么工具或者方法可以去除内含子？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2015-11-13 18:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭