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acast

新虫 (正式写手)

[求助] PCR失败求助已有4人参与

大家好,我最近开始接触PCR,但是遇到一些问题,求大家指教。

我在公司定了一个质粒,上边有我的目的基因片段(3350 bp),我自己设计了引物,PCR之后,在电泳中发现了两条带,其中一个是正常大小,因此就把胶切下来,用试剂盒提取其中的DNA,然后跑胶,也得到了正确的条带。当我在用这纯化后的DNA,做模板,用相同的试剂和条件,再次PCR,为了得到更多的产物,发现PCR上边只有小于200 bp的条带。求这种第二次PCR有什么讲究,或者没成功有什么地方需要改正的吗?
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"Hope"and"Wait"
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-字仲康

禁虫 (正式写手)


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-14 22:57:14
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3楼2015-11-12 11:17:49
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sunchilde

铁虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-14 22:57:01
“当我在用这纯化后的DNA,做模板,用相同的试剂和条件,再次PCR”
PCR有时候和模板浓度有关,模板太多的话,也P不出来。
你说的相同的试剂和条件是不是就是这个?

另外有人喜欢把胶图反过来放,你确定是你的3000+的条带被切下来了??
哈哈
2楼2015-11-12 11:11:38
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acast

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by -字仲康 at 2015-11-11 19:17:49
想要得到更多的产物,你可以就用之前的那个作为模版就好了啊。有小片段是出现引物二聚体了吧

那个片段不是引物二聚体 大概有个1100 bp的样子 该是引物连接到其他地方产生的了 问下 你觉得我的实验设计上又什么问题没有呢
"Hope"and"Wait"
4楼2015-11-12 13:16:21
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xushiqi001

新虫 (小有名气)

建议你切胶回收测个序。

发自小木虫Android客户端
5楼2015-11-12 13:19:16
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