应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR失败求助
51/1返回列表
查看: 1460  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

acast

新虫 (正式写手)

[求助] PCR失败求助 已有4人参与

大家好，我最近开始接触PCR，但是遇到一些问题，求大家指教。

我在公司定了一个质粒，上边有我的目的基因片段（3350 bp），我自己设计了引物，PCR之后，在电泳中发现了两条带，其中一个是正常大小，因此就把胶切下来，用试剂盒提取其中的DNA，然后跑胶，也得到了正确的条带。当我在用这纯化后的DNA，做模板，用相同的试剂和条件，再次PCR，为了得到更多的产物，发现PCR上边只有小于200 bp的条带。求这种第二次PCR有什么讲究，或者没成功有什么地方需要改正的吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
"Hope"and"Wait"
1楼 2015-11-12 09:25:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

acast

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by -字仲康 at 2015-11-11 19:17:49
想要得到更多的产物，你可以就用之前的那个作为模版就好了啊。有小片段是出现引物二聚体了吧

那个片段不是引物二聚体 大概有个1100 bp的样子 该是引物连接到其他地方产生的了 问下 你觉得我的实验设计上又什么问题没有呢
赞一下 回复此楼
"Hope"and"Wait"
4楼2015-11-12 13:16:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

sunchilde

铁虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-14 22:57:01
“当我在用这纯化后的DNA，做模板，用相同的试剂和条件，再次PCR”
PCR有时候和模板浓度有关，模板太多的话，也P不出来。
你说的相同的试剂和条件是不是就是这个？

另外有人喜欢把胶图反过来放，你确定是你的3000+的条带被切下来了？？
赞一下 回复此楼
哈哈
2楼2015-11-12 11:11:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-11-14 22:57:14
本帖内容被屏蔽
3楼2015-11-12 11:17:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xushiqi001

新虫 (小有名气)
建议你切胶回收测个序。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2015-11-12 13:19:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +5 ￣^￣゜汗 2026-03-19 7/350 2026-03-22 19:44 by 公瑾逍遥
[考研] 环境学硕288求调剂 +6 皮皮皮123456 2026-03-22 6/300 2026-03-22 16:52 by i_cooler
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭