24小时热门版块排行榜    

查看: 1923  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小二郎

铜虫 (初入文坛)

[求助] 紧急求助~PCR产物电泳条带,特别奇怪,LZ好崩溃,,跪求各位提供帮助 已有2人参与

各位好~~小妹新手在此求助
打算做qPCR标准品,现在用qPCR引物做普通PCR,扩增条件95℃8min,(95℃ 30s /55℃ 30S / 72℃ 30S )35个循环,72 10min,体系takra premix Taq(Ex taq verson 2.0)10u /正反引物(10mM)各1u/模版1u,电泳条带有两条,还算清晰,但并不是目的条带,其实目的条带只有100多bp, 条带居然有1000多bp,提高退火温度到60℃,条带也是这样的,空白对照除了引物并没有其它条带,请各位帮忙分析下原因,有没有人遇到这种情况?  还有一开始以为是引物合成错了,重新合成了一份,条带依然是这样的,我实在没辙了,,引物是采用文献里面的,很多外文文献都用过。。。。我的模版DNA是海水全基因组DNA
  附电泳图  marker是DL2000
图1 胶孔依次是marker/sample1/blank
图2 胶孔依次是marker/sample1/sample2

紧急求助~PCR产物电泳条带,特别奇怪,LZ好崩溃,,跪求各位提供帮助
图片1.jpg


紧急求助~PCR产物电泳条带,特别奇怪,LZ好崩溃,,跪求各位提供帮助-1
图片2.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我爱罗的风沙

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓 2015-11-11 22:58:02
楼主你好。你看你从基因组里面P出了很多条带,但是没有目的条带,这说明了一个事实:你设计的引物的特异性不够好,所以才能P出非特异性的条带。目的条带没有P出来,可能是因为:①退火温度不正确,虽然说是要TM减5-10度,但是具体温度需要自己摸索,建议拉一个温度梯度。②楼主之后72度 10分钟我认为这是不正确的,可以尝试循环后保持4度或者直接取出产物。
Kyle, Ph.D Candidate. Dep.Basic medical science,School of Medicine, Tsinghua University. Beijing, China,PostCode:100084
4楼2015-11-11 22:18:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

zhangjingwjs

新虫 (小有名气)

你确定Dna模版没有被污染吗,怎么感觉被细菌DNA污染了呢,所以才会有1000多的条带

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-11-11 20:42:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小二郎

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangjingwjs at 2015-11-11 20:42:02
你确定Dna模版没有被污染吗,怎么感觉被细菌DNA污染了呢,所以才会有1000多的条带

我的样品是环境样品,不是纯菌株样品,DNA模版是是环境微生物基因组,,,被污染了才会有1000多的条带是什么因果关系?
3楼2015-11-11 20:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangjingwjs

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小二郎 at 2015-11-11 20:45:29
我的样品是环境样品,不是纯菌株样品,DNA模版是是环境微生物基因组,,,被污染了才会有1000多的条带是什么因果关系?...

sorry理解错了,可能是引物特异性不行导致

发自小木虫Android客户端
5楼2015-11-11 23:47:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:51 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:40 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 05:45 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
请填处理意见