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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Q-PCR双峰
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weide12

银虫 (小有名气)

[求助] Q-PCR双峰 已有2人参与

同一批样品扩增4个基因，一个溶解曲线为单峰，其余有双峰，GAPDH熔解曲线也不好，请高手帮忙看看是什么原因。

Q-PCR双峰
GAPDH.jpg


Q-PCR双峰-1
IL-1β.jpg


Q-PCR双峰-2
MCP1.jpg


Q-PCR双峰-3
TNFα.jpg
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1楼 2015-11-07 19:56:19
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lylyly2006

木虫 (正式写手)
双峰，就是引物设计不好不特异，又有引物二聚体，重新设计引物，primer上面给出的引物一般都会优先没有二聚体的。求金币

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2楼2015-11-07 23:03:33
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weide12

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lylyly2006 at 2015-11-07 23:03:33
双峰，就是引物设计不好不特异，又有引物二聚体，重新设计引物，primer上面给出的引物一般都会优先没有二聚体的。求金币

这也太不专业了，引物有问题的话有的样品扩出来又没事
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3楼2015-11-07 23:33:18
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lylyly2006

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weide12 at 2015-11-07 23:33:18
这也太不专业了，引物有问题的话有的样品扩出来又没事...

我不专业，无语了。你基础不好，说了你听不懂，引物特异和样品p出来是什么关系？

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4楼2015-11-08 22:46:49
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骆驼人

金虫 (正式写手)
阴性对照NTC检测下引物二聚体，然后再检测下引物特异性须为单峰

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愿你，温柔又坚定，不轻易许诺但许的诺一定会实现，有勇气有力量，会发现一切美好的事物
5楼2015-11-09 00:02:47
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你不是四种基因么？那定是四个引物吧？第四个还不错，其他引物都有问题！lylyly2006说的怎么错啦？楼主你有毛病，不管怎么回答也没有说应助人不专业的。看还有谁回答你问题的！

你引物要么二聚体了要么不特意！

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向钱看，向厚赚
6楼2015-11-09 06:41:00
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银树苍穹

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
GAPDH看着还行吧，可能引物有降解，导致峰有少许偏差，通用的序列应该没有问题。最后一个可以的，其他的重新设计引物，仅供参考。

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7楼2015-11-09 08:01:56
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cy0726

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 银树苍穹 at 2015-11-09 08:01:56
GAPDH看着还行吧，可能引物有降解，导致峰有少许偏差，通用的序列应该没有问题。最后一个可以的，其他的重新设计引物，仅供参考。

如果不加引物也能有融解曲线就一定说明引物有二聚体吗？

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8楼2015-11-10 09:16:11
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gzbjzjchen

铜虫 (小有名气)
可以将产物跑一下看看，定量要注意稀释，稀释一半一般

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9楼2015-11-15 16:28:42
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