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weide12

银虫 (小有名气)

[求助] Q-PCR双峰 已有2人参与

同一批样品扩增4个基因,一个溶解曲线为单峰,其余有双峰,GAPDH熔解曲线也不好,请高手帮忙看看是什么原因。

Q-PCR双峰
GAPDH.jpg


Q-PCR双峰-1
IL-1β.jpg


Q-PCR双峰-2
MCP1.jpg


Q-PCR双峰-3
TNFα.jpg
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lylyly2006

木虫 (正式写手)

双峰,就是引物设计不好不特异,又有引物二聚体,重新设计引物,primer上面给出的引物一般都会优先没有二聚体的。求金币

发自小木虫IOS客户端
2楼2015-11-07 23:03:33
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weide12

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lylyly2006 at 2015-11-07 23:03:33
双峰,就是引物设计不好不特异,又有引物二聚体,重新设计引物,primer上面给出的引物一般都会优先没有二聚体的。求金币

这也太不专业了,引物有问题的话有的样品扩出来又没事
3楼2015-11-07 23:33:18
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lylyly2006

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by weide12 at 2015-11-07 23:33:18
这也太不专业了,引物有问题的话有的样品扩出来又没事...

我不专业,无语了。你基础不好,说了你听不懂,引物特异和样品p出来是什么关系?

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4楼2015-11-08 22:46:49
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骆驼人

金虫 (正式写手)

阴性对照NTC检测下引物二聚体,然后再检测下引物特异性须为单峰

发自小木虫Android客户端
愿你,温柔又坚定,不轻易许诺但许的诺一定会实现,有勇气有力量,会发现一切美好的事物
5楼2015-11-09 00:02:47
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你不是四种基因么?那定是四个引物吧?第四个还不错,其他引物都有问题!lylyly2006说的怎么错啦?楼主你有毛病,不管怎么回答也没有说应助人不专业的。看还有谁回答你问题的!

你引物要么二聚体了要么不特意!

发自小木虫IOS客户端
向钱看,向厚赚
6楼2015-11-09 06:41:00
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银树苍穹

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
GAPDH看着还行吧,可能引物有降解,导致峰有少许偏差,通用的序列应该没有问题。最后一个可以的,其他的重新设计引物,仅供参考。

发自小木虫Android客户端
7楼2015-11-09 08:01:56
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cy0726

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 银树苍穹 at 2015-11-09 08:01:56
GAPDH看着还行吧,可能引物有降解,导致峰有少许偏差,通用的序列应该没有问题。最后一个可以的,其他的重新设计引物,仅供参考。

如果不加引物也能有融解曲线就一定说明引物有二聚体吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-11-10 09:16:11
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gzbjzjchen

铜虫 (小有名气)

可以将产物跑一下看看,定量要注意稀释,稀释一半一般

发自小木虫Android客户端
9楼2015-11-15 16:28:42
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