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846031273

铜虫 (小有名气)

[求助] WB检测多抗 已有2人参与

亲们，我合成了一个多抗现在用WB检测，从真核里面杂不出条带，要么就是模糊的一片；后来试用了ProteinA拉，一部分染色，一部分用多抗杂，结果染色的很明显，条带也很单一，但是杂的反而没有，一显色背景都变成了黄色的。不知道这是不是因为上样有点多？按理说ProteinA拉的染色结果不错的话，应该能杂出条带的。多抗我是按照1:100加的，不知是不是多抗太少了。准备减少下上样量并做个多抗梯度看看
     大家有没有遇到类似问题的，是怎么解决的呢？请求帮助
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1楼 2015-11-04 21:50:06
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yorkwallace

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
846031273: 金币+5, ★有帮助 2015-11-07 23:21:06
你的意思是你的背景杂吗？多抗1:100稀释太高了，我一般是1：10000，你到底是做WB是在做COIP呀（我看到ProteinA）
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2楼2015-11-05 08:37:07
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MBB-787

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
846031273: 金币+5, ★有帮助 2015-11-07 23:21:23
你的材料是什么？可以点个正对照或Marker试试，还有可能是你的抗体加多了。

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3楼2015-11-05 08:45:34
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846031273

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yorkwallace at 2015-11-05 08:37:07
你的意思是你的背景杂吗？多抗1:100稀释太高了，我一般是1：10000，你到底是做WB是在做COIP呀（我看到ProteinA）

难道是多抗太多了？我刚刚做了个蛋白上样量的梯度，依然没有杂出东西来；但是跟我一起做抗体的同学他做了多抗梯度，也是没有条带。您看，这是我今晚刚显色的结果，唉……
看来不是蛋白上样量的原因啊
我是做WB，用的是原核表达的蛋白；用ProteinA的是从真核植株里面拉的
WB检测多抗
IMG_20151107_225734.jpg
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4楼2015-11-07 23:16:43
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846031273

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by MBB-787 at 2015-11-05 08:45:34
你的材料是什么？可以点个正对照或Marker试试，还有可能是你的抗体加多了。

我做的是玉米，现在看你们的分析可能真是抗体加多了，我再检测个抗体梯度看看
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5楼2015-11-07 23:17:42
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