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846031273

铜虫 (小有名气)

[求助] WB检测多抗 已有2人参与

亲们,我合成了一个多抗现在用WB检测,从真核里面杂不出条带,要么就是模糊的一片;后来试用了ProteinA拉,一部分染色,一部分用多抗杂,结果染色的很明显,条带也很单一,但是杂的反而没有,一显色背景都变成了黄色的。不知道这是不是因为上样有点多?按理说ProteinA拉的染色结果不错的话,应该能杂出条带的。多抗我是按照1:100加的,不知是不是多抗太少了。准备减少下上样量并做个多抗梯度看看
     大家有没有遇到类似问题的,是怎么解决的呢?请求帮助
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yorkwallace

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
846031273: 金币+5, 有帮助 2015-11-07 23:21:06
你的意思是你的背景杂吗?多抗1:100稀释太高了,我一般是1:10000,你到底是做WB是在做COIP呀(我看到ProteinA)
2楼2015-11-05 08:37:07
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MBB-787

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
846031273: 金币+5, 有帮助 2015-11-07 23:21:23
你的材料是什么?可以点个正对照或Marker试试,还有可能是你的抗体加多了。

发自小木虫Android客户端
3楼2015-11-05 08:45:34
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846031273

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yorkwallace at 2015-11-05 08:37:07
你的意思是你的背景杂吗?多抗1:100稀释太高了,我一般是1:10000,你到底是做WB是在做COIP呀(我看到ProteinA)

难道是多抗太多了?我刚刚做了个蛋白上样量的梯度,依然没有杂出东西来;但是跟我一起做抗体的同学他做了多抗梯度,也是没有条带。您看,这是我今晚刚显色的结果,唉……
看来不是蛋白上样量的原因啊
我是做WB,用的是原核表达的蛋白;用ProteinA的是从真核植株里面拉的
WB检测多抗
IMG_20151107_225734.jpg

4楼2015-11-07 23:16:43
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846031273

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by MBB-787 at 2015-11-05 08:45:34
你的材料是什么?可以点个正对照或Marker试试,还有可能是你的抗体加多了。

我做的是玉米,现在看你们的分析可能真是抗体加多了,我再检测个抗体梯度看看
5楼2015-11-07 23:17:42
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