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软弱仙人掌

银虫 (小有名气)

[求助] 酶解缓冲液及酶解过程中pH如何控制 已有3人参与

用碱性蛋白酶酶解,该酶的最适pH为8.5,需要pH8.5的缓冲液,有如下几个问题:
1)碱性缓冲液有硼酸-硼砂缓冲液,tris-盐酸缓冲液符合8.5的pH要求,这两种缓冲液都可以么?对产物的活性哪个影响小一点?
2)如果要比较不同pH条件下酶解产物的活性,如pH8.5,9,9.5,前两种缓冲液可以用硼酸-硼砂缓冲液,但是该缓冲液达不到9.5的要求,那用硼砂-氢氧化钠缓冲液来配置,会有影响么?
3)酶解过程中要始终保持某一pH不变,文献里说要加入1mol/L的氢氧化钠始终保持起始pH,这个如何操作?是在酶解过程中不停地测定pH么?
4)酶解过程需要一直搅拌么?
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散仙孔乙己

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 软弱仙人掌 at 2015-11-06 20:38:51
不用缓冲液,酶解之后不也得除盐么?而且即使用缓冲液,酶解过程pH也会发生变化的。我现在用透析的方法除盐,每次处理的量好少啊
...

不用啊,我没有引入盐分,怎么会需要除盐?使用缓冲液的话pH变化幅度不会太大,不用缓冲液的话pH变化很快的。我之前酶解液是要浓缩的,我用了十来条滤膜,处理量还讲究
7楼2015-11-09 16:46:47
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
软弱仙人掌(99503102代发): 金币+5, 谢谢应助,请继续为其他虫友解答噢! 2015-11-06 13:55:15
1)不同的物质对应最适缓冲液也不一样,你的问题别人无法给你确定的解答,这个你自己试验下不就完事了么,事实大于雄辩。
2)用氢氧化钠的缓冲液,行不行先试验。多动手。
3)酶反应过程控制PH的方式有很多,补碱或补酸,怎么补,看你的实验条件,反应釜自带PH计,有自动控制流加酸碱的蠕动泵,要么小实验就把PH开着放进反应溶液中,随时观察,随时调节。
4)当然需要一直搅拌。哎,小朋友多试验。祝顺利。
2楼2015-11-05 09:17:49
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软弱仙人掌

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-11-05 09:17:49
1)不同的物质对应最适缓冲液也不一样,你的问题别人无法给你确定的解答,这个你自己试验下不就完事了么,事实大于雄辩。
2)用氢氧化钠的缓冲液,行不行先试验。多动手。
3)酶反应过程控制PH的方式有很多,补碱 ...

实验室没有酶解釜,只能在水浴锅里搅拌酶解,这个过程调节pH需要手动,难道要十几分钟就要调一下pH么

发自小木虫Android客户端
3楼2015-11-05 13:17:33
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 软弱仙人掌 at 2015-11-05 13:17:33
实验室没有酶解釜,只能在水浴锅里搅拌酶解,这个过程调节pH需要手动,难道要十几分钟就要调一下pH么
...

对的,就是要不断的测,时间条件有限,就要辛苦啦,祝顺利。
4楼2015-11-05 15:05:20
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