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xjhdx

新虫 (初入文坛)

[交流] 猪皮明胶(pork gelatin,大约 300 bloom) 的SDS-page电泳方法及结果分析? 已有3人参与

试验中需要测定猪皮明胶(pork gelatin,大约300 bloom,购自Sigma)的SDS-page图谱,测定其分子量,及研究不同加工方法对其分子量是否有影响。

已经阅读文献,发现几篇论文中测得的猪皮明胶原子量分布均比较分散,并无确定的具体数值。很多文献都对猪皮明胶做了进一步处理(例如酶解,水解),然后将二者进行对比。

比如文献:Zhang, Z. K., Li, G. Y., Shi, B. (2006). Physicochemical properties of collagen, gelatin and collagen hydrolysate derived from bovine limed split wastes, Journal of the Society of Technologists and Chemists, 90, 23-28
试验方法: Zhang 等人将样品与0.5M的Tris-Hcl缓冲液混合(1%SDS, 10%glycerol,0.01%bromophenol blue, pH 6.8),煮沸5分钟。取15微升混合液,注射入10%的gel well中,运行120min。然后使用0.25% Coomassie Brillaint Blue R250染色45分钟,最终使用7.5%醋酸+5%甲醇脱色。
其SDS PAGE图谱如图所示:其中1为蛋白质标准,2为collagen,3为gelatin,4分水解后的collagen

他们也是简单讨论了gelatin的分子量分布在300KDa以下,分布较宽
求助如下问题:
1)猪皮明胶的SDS-page图谱是否就是如图所示这样子的?分子量分布非常分散,并无类似Collagen (第2条谱带)的那种具有具体数值的分子量分布?
2)这种很宽的分子量分布,是否由于gelatin提取过程中蛋白质变性造成(gelatin是collagen通过蛋白变性得到的)?有人告诉我说变性蛋白质的图谱就是类似的,这种说法是否正确?

感谢帮助

猪皮明胶(pork gelatin,大约 300 bloom) 的SDS-page电泳方法及结果分析?
gelatin-SDS page.jpg
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valleybeau

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
明胶是胶原在高温作用下的变性产物,其组成复杂,相对分子质量分布宽,由于高温造成胶原蛋白变性,胶原分子的3股螺旋结构被破坏,但可能有部分α链的螺旋链还存在,因此一定浓度的明胶溶液能成凝胶状。
2楼2014-05-21 10:38:40
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xjhdx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by valleybeau at 2014-05-21 10:38:40
明胶是胶原在高温作用下的变性产物,其组成复杂,相对分子质量分布宽,由于高温造成胶原蛋白变性,胶原分子的3股螺旋结构被破坏,但可能有部分α链的螺旋链还存在,因此一定浓度的明胶溶液能成凝胶状。

感谢回复!
是的,通过阅读文献,我也了解到了胶原蛋白的分子量分布确实很宽,是因为triple-helix的结构在蛋白变性过程中被部分破坏,通过circular dichroism测得仍然存在部分triple-helix结构。
但是你所说的“...因此一定浓度的明胶溶液能成凝胶状...””的意思是:
1-胶原蛋白可以通过凝胶形成三为网状结构?
还是
2-拥有一定浓度的胶原蛋白可以在SDS-PAGE图谱中具有明显的明确的分子量band?

谢谢并祝好
3楼2014-05-22 11:47:10
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mome7

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没明白电泳图里2是怎么来的 看你后面俩感觉像没处理好样品没跑出来东西啊 或者确实明胶比较特殊形成凝胶了 想知道凝胶啥样 用点水溶解就知道 1:13加热后冷却就是 不知道变性蛋白电泳图啥样 抱歉

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一直坚强下去才会离幸福越来越近
4楼2014-05-23 11:21:06
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qiguangce

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
谱图和理论很符合。
胶原蛋白是未分解的大分子,当然在最上面。
明胶是胶原蛋白随即分解得到,自然是充满整条谱带
最后一掉也就是collagen hrdrolysate,就是胶原蛋白肽,就是明胶再水解,一般平均分子量1w以下,5000比较普遍,自然在最下方。

胶原、胶原蛋白肽不具有凝胶性
5楼2014-08-18 11:12:33
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xjhdx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qiguangce at 2014-08-18 11:12:33
谱图和理论很符合。
胶原蛋白是未分解的大分子,当然在最上面。
明胶是胶原蛋白随即分解得到,自然是充满整条谱带
最后一掉也就是collagen hrdrolysate,就是胶原蛋白肽,就是明胶再水解,一般平均分子量1w以下, ...

多谢解答
6楼2016-06-10 07:59:44
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