24小时热门版块排行榜    

查看: 2956  |  回复: 5

xjhdx

新虫 (初入文坛)

[交流] 猪皮明胶(pork gelatin,大约 300 bloom) 的SDS-page电泳方法及结果分析? 已有3人参与

试验中需要测定猪皮明胶(pork gelatin,大约300 bloom,购自Sigma)的SDS-page图谱,测定其分子量,及研究不同加工方法对其分子量是否有影响。

已经阅读文献,发现几篇论文中测得的猪皮明胶原子量分布均比较分散,并无确定的具体数值。很多文献都对猪皮明胶做了进一步处理(例如酶解,水解),然后将二者进行对比。

比如文献:Zhang, Z. K., Li, G. Y., Shi, B. (2006). Physicochemical properties of collagen, gelatin and collagen hydrolysate derived from bovine limed split wastes, Journal of the Society of Technologists and Chemists, 90, 23-28
试验方法: Zhang 等人将样品与0.5M的Tris-Hcl缓冲液混合(1%SDS, 10%glycerol,0.01%bromophenol blue, pH 6.8),煮沸5分钟。取15微升混合液,注射入10%的gel well中,运行120min。然后使用0.25% Coomassie Brillaint Blue R250染色45分钟,最终使用7.5%醋酸+5%甲醇脱色。
其SDS PAGE图谱如图所示:其中1为蛋白质标准,2为collagen,3为gelatin,4分水解后的collagen

他们也是简单讨论了gelatin的分子量分布在300KDa以下,分布较宽
求助如下问题:
1)猪皮明胶的SDS-page图谱是否就是如图所示这样子的?分子量分布非常分散,并无类似Collagen (第2条谱带)的那种具有具体数值的分子量分布?
2)这种很宽的分子量分布,是否由于gelatin提取过程中蛋白质变性造成(gelatin是collagen通过蛋白变性得到的)?有人告诉我说变性蛋白质的图谱就是类似的,这种说法是否正确?

感谢帮助

猪皮明胶(pork gelatin,大约 300 bloom) 的SDS-page电泳方法及结果分析?
gelatin-SDS page.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

valleybeau

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
明胶是胶原在高温作用下的变性产物,其组成复杂,相对分子质量分布宽,由于高温造成胶原蛋白变性,胶原分子的3股螺旋结构被破坏,但可能有部分α链的螺旋链还存在,因此一定浓度的明胶溶液能成凝胶状。
2楼2014-05-21 10:38:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjhdx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by valleybeau at 2014-05-21 10:38:40
明胶是胶原在高温作用下的变性产物,其组成复杂,相对分子质量分布宽,由于高温造成胶原蛋白变性,胶原分子的3股螺旋结构被破坏,但可能有部分α链的螺旋链还存在,因此一定浓度的明胶溶液能成凝胶状。

感谢回复!
是的,通过阅读文献,我也了解到了胶原蛋白的分子量分布确实很宽,是因为triple-helix的结构在蛋白变性过程中被部分破坏,通过circular dichroism测得仍然存在部分triple-helix结构。
但是你所说的“...因此一定浓度的明胶溶液能成凝胶状...””的意思是:
1-胶原蛋白可以通过凝胶形成三为网状结构?
还是
2-拥有一定浓度的胶原蛋白可以在SDS-PAGE图谱中具有明显的明确的分子量band?

谢谢并祝好
3楼2014-05-22 11:47:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mome7

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没明白电泳图里2是怎么来的 看你后面俩感觉像没处理好样品没跑出来东西啊 或者确实明胶比较特殊形成凝胶了 想知道凝胶啥样 用点水溶解就知道 1:13加热后冷却就是 不知道变性蛋白电泳图啥样 抱歉

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
一直坚强下去才会离幸福越来越近
4楼2014-05-23 11:21:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiguangce

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
谱图和理论很符合。
胶原蛋白是未分解的大分子,当然在最上面。
明胶是胶原蛋白随即分解得到,自然是充满整条谱带
最后一掉也就是collagen hrdrolysate,就是胶原蛋白肽,就是明胶再水解,一般平均分子量1w以下,5000比较普遍,自然在最下方。

胶原、胶原蛋白肽不具有凝胶性
5楼2014-08-18 11:12:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjhdx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qiguangce at 2014-08-18 11:12:33
谱图和理论很符合。
胶原蛋白是未分解的大分子,当然在最上面。
明胶是胶原蛋白随即分解得到,自然是充满整条谱带
最后一掉也就是collagen hrdrolysate,就是胶原蛋白肽,就是明胶再水解,一般平均分子量1w以下, ...

多谢解答
6楼2016-06-10 07:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xjhdx 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见