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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 其他 » 酶解缓冲液及酶解过程中pH如何控制
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软弱仙人掌

银虫 (小有名气)

[求助] 酶解缓冲液及酶解过程中pH如何控制 已有3人参与

用碱性蛋白酶酶解，该酶的最适pH为8.5，需要pH8.5的缓冲液，有如下几个问题：
1)碱性缓冲液有硼酸-硼砂缓冲液，tris-盐酸缓冲液符合8.5的pH要求，这两种缓冲液都可以么？对产物的活性哪个影响小一点？
2)如果要比较不同pH条件下酶解产物的活性，如pH8.5,9,9.5，前两种缓冲液可以用硼酸-硼砂缓冲液，但是该缓冲液达不到9.5的要求，那用硼砂-氢氧化钠缓冲液来配置，会有影响么？
3)酶解过程中要始终保持某一pH不变，文献里说要加入1mol/L的氢氧化钠始终保持起始pH，这个如何操作？是在酶解过程中不停地测定pH么？
4)酶解过程需要一直搅拌么？
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1楼 2015-11-04 19:38:00
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
软弱仙人掌(99503102代发): 金币+5, 谢谢应助，请继续为其他虫友解答噢！ 2015-11-06 13:55:15
1）不同的物质对应最适缓冲液也不一样，你的问题别人无法给你确定的解答，这个你自己试验下不就完事了么，事实大于雄辩。
2）用氢氧化钠的缓冲液，行不行先试验。多动手。
3）酶反应过程控制PH的方式有很多，补碱或补酸，怎么补，看你的实验条件，反应釜自带PH计，有自动控制流加酸碱的蠕动泵，要么小实验就把PH开着放进反应溶液中，随时观察，随时调节。
4）当然需要一直搅拌。哎，小朋友多试验。祝顺利。
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2楼2015-11-05 09:17:49
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软弱仙人掌

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-11-05 09:17:49
1）不同的物质对应最适缓冲液也不一样，你的问题别人无法给你确定的解答，这个你自己试验下不就完事了么，事实大于雄辩。
2）用氢氧化钠的缓冲液，行不行先试验。多动手。
3）酶反应过程控制PH的方式有很多，补碱 ...

实验室没有酶解釜，只能在水浴锅里搅拌酶解，这个过程调节pH需要手动，难道要十几分钟就要调一下pH么

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3楼2015-11-05 13:17:33
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 软弱仙人掌 at 2015-11-05 13:17:33
实验室没有酶解釜，只能在水浴锅里搅拌酶解，这个过程调节pH需要手动，难道要十几分钟就要调一下pH么
...

对的，就是要不断的测，时间条件有限，就要辛苦啦，祝顺利。
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4楼2015-11-05 15:05:20
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散仙孔乙己

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sytucom: 金币+2, 鼓励新虫参与 2015-11-06 22:24:46
我之前做蛋白质酶解的时候用的也是碱性蛋白酶，不过考虑到用缓冲液酶解后脱盐也是一个很痛苦的过程，所以我的方案是就是用水溶解蛋白酶后，直接加酸或者加碱调到所需的ｐＨ，酶解过程中通过配置适当的酸溶液适时调节ｐＨ
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5楼2015-11-06 16:53:35
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软弱仙人掌

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 散仙孔乙己 at 2015-11-06 16:53:35
我之前做蛋白质酶解的时候用的也是碱性蛋白酶，不过考虑到用缓冲液酶解后脱盐也是一个很痛苦的过程，所以我的方案是就是用水溶解蛋白酶后，直接加酸或者加碱调到所需的ｐＨ，酶解过程中通过配置适当的酸溶液适时调节 ...

不用缓冲液，酶解之后不也得除盐么？而且即使用缓冲液，酶解过程pH也会发生变化的。我现在用透析的方法除盐，每次处理的量好少啊

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6楼2015-11-06 20:38:51
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散仙孔乙己

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 软弱仙人掌 at 2015-11-06 20:38:51
不用缓冲液，酶解之后不也得除盐么？而且即使用缓冲液，酶解过程pH也会发生变化的。我现在用透析的方法除盐，每次处理的量好少啊
...

不用啊，我没有引入盐分，怎么会需要除盐？使用缓冲液的话pH变化幅度不会太大，不用缓冲液的话pH变化很快的。我之前酶解液是要浓缩的，我用了十来条滤膜，处理量还讲究
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7楼2015-11-09 16:46:47
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xiaoqiuze

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-11-05 09:17:49
1）不同的物质对应最适缓冲液也不一样，你的问题别人无法给你确定的解答，这个你自己试验下不就完事了么，事实大于雄辩。
2）用氢氧化钠的缓冲液，行不行先试验。多动手。
3）酶反应过程控制PH的方式有很多，补碱 ...

有没有酶解全自动仪器的推荐，就是可以自动调节pH，有没有什么型号？
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8楼2017-11-14 14:25:31
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