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zjsuiyuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆 已有6人参与

本人正在做基因克隆，但是第一步做pcr，发现pcr产物是多带，不明白原因，求各位大牛帮忙！

基因克隆


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1楼 2015-10-31 20:11:43
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akane1020

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-01 17:59:50
ps 引物设计要求至少有3'end的12个碱基跟模板完全一致，而且最好3'end 以G 或C结尾。同时Tm 在60-70中间比较好。

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5楼2015-10-31 21:01:11
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-01 17:59:33
多带就是有好多非特异性条带咯，应该是引物的问题。不过你切胶回收就好了啊，切好就行。
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2楼2015-10-31 20:22:53
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zjsuiyuan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2015-10-31 20:22:53
多带就是有好多非特异性条带咯，应该是引物的问题。不过你切胶回收就好了啊，切好就行。

就是因为非特异性条带太多了，所以才不好切和纯化，无法回收到目的片段，请问引物如何设计呢？

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3楼2015-10-31 20:31:41
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akane1020

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-11-01 17:59:45
可以考虑以下几点：
1. 模板纯吗？
2.引物的binding
3. annealing temperature 是不是不合适

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4楼2015-10-31 20:58:29
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