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zjsuiyuan

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆 已有6人参与

本人正在做基因克隆,但是第一步做pcr,发现pcr产物是多带,不明白原因,求各位大牛帮忙!

基因克隆


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zjsuiyuan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2015-10-31 20:22:53
多带就是有好多非特异性条带咯,应该是引物的问题。不过你切胶回收就好了啊,切好就行。

就是因为非特异性条带太多了,所以才不好切和纯化,无法回收到目的片段,请问引物如何设计呢?

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3楼2015-10-31 20:31:41
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-11-01 17:59:33
多带就是有好多非特异性条带咯,应该是引物的问题。不过你切胶回收就好了啊,切好就行。
2楼2015-10-31 20:22:53
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akane1020

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-11-01 17:59:45
可以考虑以下几点:
1. 模板纯吗?
2.引物的binding
3. annealing temperature 是不是不合适

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4楼2015-10-31 20:58:29
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akane1020

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-11-01 17:59:50
ps 引物设计要求至少有3'end的12个碱基跟模板完全一致,而且最好3'end 以G 或C结尾。同时Tm 在60-70中间比较好。

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5楼2015-10-31 21:01:11
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