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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白浓度标准曲线的问题
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)

[求助] 蛋白浓度标准曲线的问题 已有3人参与

做蛋白浓度标准曲线的时候有个小疑问，取10ul的5mg/ml的标准蛋白溶液稀释到100ul时液体的选择，是用三蒸水还是溶解我的溶解蛋白样品的溶液？比如我测的是细胞内总蛋白，用细胞裂解液裂解的细胞，那我是不是应该用细胞裂解液来溶解我的标准蛋白来做标准曲线？
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脚踏实地
1楼 2015-10-22 20:37:01
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bhl2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我认为是的。我觉得主要看你的测试方法对你裂解液成份的兼容性。如果裂解液成分没影响那就都一样呗。

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2楼2015-10-22 22:08:30
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厚德求是

金虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议俩都试试看，这样才能看出来区别。如果没有区别，那就没关系。如果有，还是选溶解液那个，因为溶解液里面可能有了干扰成分，标准曲线制作过程中就排除这个影响比较好。

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3楼2015-10-23 08:19:10
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 厚德求是 at 2015-10-23 08:19:10
建议俩都试试看，这样才能看出来区别。如果没有区别，那就没关系。如果有，还是选溶解液那个，因为溶解液里面可能有了干扰成分，标准曲线制作过程中就排除这个影响比较好。
...

做了个对照，用三蒸水溶解得到的标准曲线R平方值0.96，用细胞裂解液溶解得到的R平方值只有0.88，细胞裂解液可能有干扰成分
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脚踏实地
4楼2015-10-23 16:20:40
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奔跑的乌拉龟

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bhl2012 at 2015-10-22 22:08:30
我认为是的。我觉得主要看你的测试方法对你裂解液成份的兼容性。如果裂解液成分没影响那就都一样呗。

做了个对照，用三蒸水溶解得到的标准曲线R平方值0.96，用细胞裂解液溶解得到的R平方值只有0.88，细胞裂解液可能有干扰成分
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脚踏实地
5楼2015-10-23 16:20:59
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厚德求是

金虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

【答案】应助回帖

是的，你破胞用其他方法试试看，溶解法本身就有很多酶

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6楼2015-10-23 16:21:57
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踏火

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们这用PBS和去离子水稀释，出来的结果基本没有区别
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我昭武的理想已留在七年前的火雷原上了
7楼2015-11-23 21:37:55
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wuhao3075

新虫 (正式写手)
为什么不用细胞破碎仪裂解细胞呢？

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8楼2015-11-24 01:40:30
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