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tianti_121

新虫 (小有名气)

[求助] 测序结果5‘端和3’端经常会出现错误吗? 已有6人参与

我有好几处测序5‘端和3’端都会与设计的引物序列不一样,是测序结果不准确呢,还是真的PCR的问题呢?

附图大家帮忙给看看。起始密码子是ATG,结果却是CAT?终止密码子TAA,测序结果却是AAA?这到底是怎么一回事?不解中!

谢谢大家!

测序结果5‘端和3’端经常会出现错误吗?
终止密码子部位.png


测序结果5‘端和3’端经常会出现错误吗?-1
起始密码子部位.png
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sundan611

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
tianti_121: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-10-28 10:50:48
1.1500bp左右的目的基因,一定要双向测序然后拼接在比对结果,普通测序反应800-900bp,何况头30-50bp序列也是不准确的。
2.先看峰图,峰图杂乱结果就不用考虑了,没意义。
3.用PUC19通用引物测序,如果正确,你可以看到自己的引物序列。
12楼2015-10-26 09:16:08
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sunshine436

新虫 (小有名气)

遇到这种情况,要看峰图上读的是什么,另外你的测序引物设计的要离目的基因远一点,要不然读的不准确。

发自小木虫Android客户端
2楼2015-10-22 17:57:25
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是连载体测序还是直接PCR产物测序?
3楼2015-10-22 20:34:05
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tianti_121

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2015-10-22 20:34:05
是连载体测序还是直接PCR产物测序?

连载体测序,puc19,目的基因大概1500左右,使用通用引物M17测序
4楼2015-10-22 23:00:11
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