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smaileon

新虫 (小有名气)

[求助] sds-page电泳marker的条带不能完全跑出来,有什么原因。 已有6人参与

国庆到现在跑了好多次电泳,marker明明有七条带的,只能跑出六条。跑了几次都是六条条带,一开始以为跑的不够长,后面都跑到溴酚蓝都快出来了,还是六条,觉得心酸。
然后就把marker再取一点出来拿去煮和离心后再点样,结果更少了,也更不清楚了。
会是Ph的问题吗?还是marker的问题,用了一年多了。
我在做重组的酵母菌(黑曲酶碱性蛋白酶)的酶活性质优化。
一点都不顺畅,好心塞。

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1203125603

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
smaileon: 金币+2, ★★★很有帮助, 现在12%的胶都是跑到还剩1cm 2015-10-25 21:02:52
youlinglyw: 金币+8, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩 2015-10-27 10:08:53
12%以上的胶,当你的溴酚蓝那条线离板底0.5cm左右就停止电泳的话,Maker都是能跑出7条带的,当然前提是你的胶浓度是准确的。而15%的胶一般溴酚蓝跑出板底也基本能跑出7条带,因为好几次忙不过来,跑电泳的时候忘记了,经常会出现这种情况,但是经过长期实验,发现没有问题。同时,若您的胶浓度只有10%或者7%甚至更低的话,根据我的经验,10%浓度的胶要在离板底2cm左右的时候停止电泳,7%的胶需要更早,差不多3cm左右吧。
7楼2015-10-19 13:01:56
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weandyouzhy

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩 2015-10-27 10:08:22
增加电压或延长保留时间,看看别人是否一样的结果。marker是否用错

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everything*will*be*OK!so*never*give*up,man!
2楼2015-10-17 08:23:25
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jjf139

金虫 (著名写手)

新药研发&药物分析

★ ★
smaileon(youlinglyw代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩 2015-10-27 10:08:37
电泳条件看看是否合适,建议看看你的marker有无降解。

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3楼2015-10-17 08:33:31
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smaileon

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jjf139 at 2015-10-17 08:33:31
电泳条件看看是否合适,建议看看你的marker有无降解。

怎么看marker蛋白质是否有降解?
一般都有保存在负20度冰箱的。

平时电泳用80v把它们压一段时间,想把它们压成一条线,但是压不成,都是两层的感觉。也很奇怪。

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4楼2015-10-17 08:42:18
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