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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » sds-page电泳marker的条带不能完全跑出来，有什么原因。
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smaileon

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] sds-page电泳marker的条带不能完全跑出来，有什么原因。 已有6人参与

国庆到现在跑了好多次电泳，marker明明有七条带的，只能跑出六条。跑了几次都是六条条带，一开始以为跑的不够长，后面都跑到溴酚蓝都快出来了，还是六条，觉得心酸。
然后就把marker再取一点出来拿去煮和离心后再点样，结果更少了，也更不清楚了。
会是Ph的问题吗？还是marker的问题，用了一年多了。
我在做重组的酵母菌（黑曲酶碱性蛋白酶）的酶活性质优化。
一点都不顺畅，好心塞。

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1楼 2015-10-17 08:19:32
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恶魔的左眼

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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youlinglyw: 金币+8, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2015-10-27 10:08:00
有可能是Mark堆积在一起了，导致俩条带分不清。
1 跑浓缩胶的电压是多少？上样后是否立即加电压进行电泳
2 配胶用的试剂是不是新配？特别是Tris-HCl6.8和8.8这两个的PH值
3 也可适当增加浓缩胶的长度，以80V电压进行浓缩胶跑样，待样品进入分离胶后换成120V电压试试。
最后就是你做的SDS中酵母蛋白表达的条带是否有影响？
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
8楼2015-10-19 13:27:26
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普通回帖

weandyouzhy

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2015-10-27 10:08:22
增加电压或延长保留时间，看看别人是否一样的结果。marker是否用错

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everything*will*be*OK！so*never*give*up,man!
2楼2015-10-17 08:23:25
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jjf139

版主

新药研发&药物分析

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★ ★
smaileon(youlinglyw代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2015-10-27 10:08:37
电泳条件看看是否合适，建议看看你的marker有无降解。

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3楼2015-10-17 08:33:31
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smaileon

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by jjf139 at 2015-10-17 08:33:31
电泳条件看看是否合适，建议看看你的marker有无降解。

怎么看marker蛋白质是否有降解？
一般都有保存在负20度冰箱的。

平时电泳用80v把它们压一段时间，想把它们压成一条线，但是压不成，都是两层的感觉。也很奇怪。

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4楼2015-10-17 08:42:18
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smaileon

超级版主

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引用回帖:
2楼: Originally posted by weandyouzhy at 2015-10-17 08:23:25
增加电压或延长保留时间，看看别人是否一样的结果。marker是否用错

现在用的是80v压，100v跑分离胶，一般都是跑一个多小时，估计那块胶就十厘米这样。。

我怕电压大了，时间就短了，大的还没来得及分离，小的已经跑出去了。

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5楼2015-10-17 08:45:34
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syhzlsd

管理员

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【答案】应助回帖

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smaileon: 金币+1, ★有帮助 2015-10-25 21:02:01
是maker最后一条带没跑出来吗？其他条带有没有下移？有可能是你的胶的原因，检查你的试剂的pH看看，我们也遇到过，B液的pH尤为关键！
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6楼2015-10-19 11:17:15
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1203125603

新虫

【答案】应助回帖

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smaileon: 金币+2, ★★★很有帮助, 现在12%的胶都是跑到还剩1cm 2015-10-25 21:02:52
youlinglyw: 金币+8, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2015-10-27 10:08:53
12%以上的胶，当你的溴酚蓝那条线离板底0.5cm左右就停止电泳的话，Maker都是能跑出7条带的，当然前提是你的胶浓度是准确的。而15%的胶一般溴酚蓝跑出板底也基本能跑出7条带，因为好几次忙不过来，跑电泳的时候忘记了，经常会出现这种情况，但是经过长期实验，发现没有问题。同时，若您的胶浓度只有10%或者7%甚至更低的话，根据我的经验，10%浓度的胶要在离板底2cm左右的时候停止电泳，7%的胶需要更早，差不多3cm左右吧。
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7楼2015-10-19 13:01:56
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hlx19900318

主管区长

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2015-10-27 10:09:03
是不是你的蛋白分子量较大，因为常用的marker最小的一条差不多是14kd，如果目的蛋白分子量过大，选用的胶浓度就会比较低，最小的marker很容易跑出去，如果你想检测marker是否有问题，建议选用高浓度的胶并减少跑胶时间，祝实验顺利
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9楼2015-10-19 16:20:54
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hlx19900318

超级版主

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【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by hlx19900318 at 2015-10-19 16:20:54
是不是你的蛋白分子量较大，因为常用的marker最小的一条差不多是14kd，如果目的蛋白分子量过大，选用的胶浓度就会比较低，最小的marker很容易跑出去，如果你想检测marker是否有问题，建议选用高浓度的胶并减少跑胶时 ...

更正一下，最小的marker应该是7kd左右
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10楼2015-10-19 16:36:50
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