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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，关于100kDa蛋白诱导表达条件
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784269560

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，关于100kDa蛋白诱导表达条件 已有2人参与

大家好。我在做100KDa蛋白表达条件，载体为pet32a，表达菌株为Rossta,尝试了1mM和0.5mMIPTG浓度，转速为160，在30度与37度分别诱导５ｈ，但是一点目的蛋白都看不到。请问有谁做过类似的蛋白，能给些经验节省时间。求大家帮帮忙。时间紧啊没办法换载体了。谢谢了
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1楼 2015-10-16 11:40:52
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784269560

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 粒粒分明 at 2015-10-22 16:44:32
你检索了吗？稀有密码子多吗？
...

我看过并不多，我个人觉得可能是片段有些大，我在摇菌过程中发现质粒还容易丢失，和以前做小片段 的蛋白比质粒稳定性差。BL21我们这也有，现在用的少，基本都用rossta。
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11楼2015-10-22 16:51:05
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tolobio

新虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 应助指数-1, 请勿刷应助指数，已经看到您很多次无用的应助了。谢谢你的理解与配合。 2015-10-17 18:03:06
蛋白各不相同。即使别人做过，也很难给你什么有用的建议。基本的摸索大家都差不多：比如换宿主，换tag，换诱导条件等等。比较麻烦。建议还是找公司来做比较省事：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154
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2楼2015-10-16 15:35:34
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-17 18:02:08
你这是原核真核表达，哦rossta是原核表达哈，100kb也不小了，你这没表达，是上清没有表达还是沉淀没有表达，如果是上清，估计你的目的条带在沉淀里吧，形成包涵体了，说点明白些吧
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3楼2015-10-16 15:50:04
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784269560

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by MarchZR at 2015-10-16 15:50:04
你这是原核真核表达，哦rossta是原核表达哈，100kb也不小了，你这没表达，是上清没有表达还是沉淀没有表达，如果是上清，估计你的目的条带在沉淀里吧，形成包涵体了，说点明白些吧...

我只是初步诱导，就是直接拿菌液加上样缓冲液混匀煮沸离心取上清加的样，但是一点目的带都没有。完全没有表达
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4楼2015-10-17 10:01:17
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