24小时热门版块排行榜    

查看: 1880  |  回复: 12

784269560

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,关于100kDa蛋白诱导表达条件 已有2人参与

大家好。我在做100KDa蛋白表达条件,载体为pet32a,表达菌株为Rossta,尝试了1mM和0.5mMIPTG浓度,转速为160,在30度与37度分别诱导5h,但是一点目的蛋白都看不到。请问有谁做过类似的蛋白,能给些经验节省时间。求大家帮帮忙。时间紧啊没办法换载体了。谢谢了
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

784269560

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by MarchZR at 2015-10-19 11:05:19
啥都不说 上序列...

ATGTTGGCAGGAGAAGAAAGCACCATCCTCTTAGAAGCACTGGAAGGTCTCACACTCGAAGACTTCCAAGAGTTCAAGAA
GAAGCTGCCACACACTGATATCGAAGGAGGCTGGAACATCGGCAGGGATGAGCTGGAGAAGGTCACCCATCCTTCCTCAC
TCATCAGTTATATGGGCGACAGCTATGGGGAAGGTGCTGCTATGGACATTGCCATCAGTCTGTTTGAGGAGATGAACCAG
AGGGACCTTGCTGAAAAAATCCTTGATGAGAAGGTGAAAGAGTATAAGCAGAAATACACAGAGCACGTGGCCAGAGAGTT
CCTGCAGTACAAAGAGGCGAATTCCTGCCTAGGGGAGAACCTGTCTGTGCGCGACCGCTACACCAACCTGACCATAGCCA
GGAAGTCTTGGGATCAGCACGGAGATGAGCCTGGAGATGTCAGCTCTGACACTGTCACCACACAAACACTCTTTGAACCC
AGCAAAGATGGCCAGGTGCCTCTGATCACGGTGCTGGTGGGTGCCTCTGGCATGGGGAAGACGATGACGATCAGGAAGGT
GATGATGGAGTGGGTGGAAGGGACCCTCTGCACACAGTTTGACTATGTCTTCTGCATAGACTGCAAGGAGCTTTCCTTTT
CCAAAGAAGTGAGCATGGTGGACCTGATTTCAAAATGCTGCCCTCAACAGCGAATGCCGGCTGGAAGGATTTTGGGTAAC
CCGGAGAAGATCCTGTTCATCTTTGATAGCTTTGAGGCCCTGGGATTGCCCTTGGCTCAGCCGAAGGACGAGCTGAGCAC
TGACCCCACGGAAGCCAGACCACTGGAAACCACCCTGCTGAGCTTGCTCAGGAGAACAGTCCTCCCTGAGTCCTCTGTGC
TCATTGCCACGAGACCAGCAGCTCTCCAGAGCCTGGGGCAGTGCCTGGAGGGCAAGCATTATGTGGAAATCCTGGGGTTT
TCACCAGCTGCAAGGGAGGAGTATTTCCACAGGTATTTTGGGAATGACAATAAAGCAGATGTGGCCTTCAGGTTTACCAG
GGGAAATGAGGTCCTCTACAGCTTGTGTGTCATCCCCGTCATGAGCTGGACTGTCTGCACCGTCCTTGAGCGAGAGCTGT
ACGAGAGGAATCAGCTCCTTGCGTGCTCTAAGACCACCACACAGATGATCATGTTCTACCTCTCCTGGTTAATGAAGCAT
AGAGTCAGCAATGCCTGGCAGAACCTGCAGCAGTTCCTGCACAAGCTTTGCTCCTTGGCTGCTGACGGCATCTGGAAGCA
CAAGGTCCTCTTTGAGGAGAAGGAAATTGAGGACCAAGGCCTGAATCAGCCACAGCTCCTCTCCCTCTTCCTCAATGAGA
AAGGTTTGGAGAAAGGCACAGACCATGTGAATGTCTACAGCTTCAGCCACCTGCACCTCCAGGAGCTCTTCGCAGCGATG
TTTTACGTCCTGGAGGACCAGGACGGAATGGTCAGTGACTCACGGATCCTTGCAAAGGACGTGAATATGTTGTTAGAAAG
CTACCACACATCTAGGATGGATTTAAACGTCACAGTGAGGCTCCTGTTTGGTCTGGTGAACCCCAAGTCAGTAGAGTACG
CGGGTGAAGGAATCGGGTGCAGAATTTCATTGCAACCTCGGGAAGATCTGCTGAGGTGGCTTCAGACACGGCCCAGAGGC
ACTTCCCATCCCCGCGAAGTGATGAAGATTGAGGATTTGGACACCTTCCACCTTTTATTCGAGACAAACGAAAAAAGCTT
TGTGCAGAGCGTGTTGGGCAGTTTCACAGGAATAGCCTTGCAGGACGTCAAGCTGACACTGTATGACCAGGCGGCTCTTT
GCTTCTGCATCAAGCAGTGGGCCGGGCTGCTCAGTGTCACCCTCCGGAGCTGCTCTTTCCACCAGCAGCATCACAGGCAG
GAGCCAGCCAAGGGCTTGCCCCGGCAGAGCTGGCAGCAGGAGGAGCTGCACTCACCTCTGCACCCGCTGTGCCAGGCCCT
GGGGCACCCAGGCAGCTCACTCCAGAGCCTCAGGCTGCAGTGGTGCGGGCTGACGGAGGGTGACAGCGGGGCGCTGGGGA
CGCTGCTGGCCACGCTCCCCAGCCTGGTCCACTTGGAGCTGGGCGACGGAGCGCTGGGTGATGATGGTGTGAGGATGCTC
TGTGCCGGGCTGCGCCAACCCGGCTGCCAGCTGCGTGTCCTGCGGGAATGA
6楼2015-10-19 14:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
784269560: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-10-22 15:52:29
引用回帖:
6楼: Originally posted by 784269560 at 2015-10-19 14:23:51
ATGTTGGCAGGAGAAGAAAGCACCATCCTCTTAGAAGCACTGGAAGGTCTCACACTCGAAGACTTCCAAGAGTTCAAGAA
GAAGCTGCCACACACTGATATCGAAGGAGGCTGGAACATCGGCAGGGATGAGCTGGAGAAGGTCACCCATCCTTCCTCAC
TCATCAGTTATATGGGCGACAGCTATGGGGAAGG ...

这个基因是没有问题的,那你就多摸索一下表达条件,载体一时两时不好换,你就换个表达菌株 BL21 表达条件换成15度试试看,完了再说
8楼2015-10-20 16:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

tolobio

新虫 (小有名气)


商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 应助指数-1, 请勿刷应助指数,已经看到您很多次无用的应助了。谢谢你的理解与配合。 2015-10-17 18:03:06
蛋白各不相同。即使别人做过,也很难给你什么有用的建议。基本的摸索大家都差不多:比如换宿主,换tag,换诱导条件等等。比较麻烦。建议还是找公司来做比较省事:http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154
2楼2015-10-16 15:35:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2015-10-17 18:02:08
你这是原核真核表达,哦rossta是原核表达哈,100kb也不小了,你这没表达,是上清没有表达还是沉淀没有表达,如果是上清,估计你的目的条带在沉淀里吧,形成包涵体了,说点明白些吧
3楼2015-10-16 15:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

784269560

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by MarchZR at 2015-10-16 15:50:04
你这是原核真核表达,哦rossta是原核表达哈,100kb也不小了,你这没表达,是上清没有表达还是沉淀没有表达,如果是上清,估计你的目的条带在沉淀里吧,形成包涵体了,说点明白些吧...

我只是初步诱导,就是直接拿菌液加上样缓冲液混匀煮沸离心取上清加的样,但是一点目的带都没有。完全没有表达
4楼2015-10-17 10:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 784269560 at 2015-10-17 10:01:17
我只是初步诱导,就是直接拿菌液加上样缓冲液混匀煮沸离心取上清加的样,但是一点目的带都没有。完全没有表达...

啥都不说 上序列
5楼2015-10-19 11:05:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

粒粒分明

新虫 (初入文坛)

换一下表达菌株呢?我通常都是Pet系列载体用BL21菌株

发自小木虫IOS客户端
7楼2015-10-19 14:37:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

784269560

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 粒粒分明 at 2015-10-19 14:37:35
换一下表达菌株呢?我通常都是Pet系列载体用BL21菌株

两者差别应该不大吧,好像rossta比BL21好一些吧,可以翻译稀有密码子
9楼2015-10-22 16:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

粒粒分明

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 784269560 at 2015-10-22 16:08:51
两者差别应该不大吧,好像rossta比BL21好一些吧,可以翻译稀有密码子...

你检索了吗?稀有密码子多吗?

发自小木虫IOS客户端
10楼2015-10-22 16:44:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 784269560 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +3 pin8023 2026-02-28 5/250 2026-03-02 00:24 by 花YOU重开日
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[基金申请] 成果系统访问量大,请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦,已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 0805总分292,求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博!
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂; 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[基金申请] 刚录用,没有期刊号,但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
请填处理意见