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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，关于100kDa蛋白诱导表达条件
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784269560

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，关于100kDa蛋白诱导表达条件 已有2人参与

大家好。我在做100KDa蛋白表达条件，载体为pet32a，表达菌株为Rossta,尝试了1mM和0.5mMIPTG浓度，转速为160，在30度与37度分别诱导５ｈ，但是一点目的蛋白都看不到。请问有谁做过类似的蛋白，能给些经验节省时间。求大家帮帮忙。时间紧啊没办法换载体了。谢谢了
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1楼 2015-10-16 11:40:52
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784269560

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by MarchZR at 2015-10-19 11:05:19
啥都不说 上序列...

ATGTTGGCAGGAGAAGAAAGCACCATCCTCTTAGAAGCACTGGAAGGTCTCACACTCGAAGACTTCCAAGAGTTCAAGAA
GAAGCTGCCACACACTGATATCGAAGGAGGCTGGAACATCGGCAGGGATGAGCTGGAGAAGGTCACCCATCCTTCCTCAC
TCATCAGTTATATGGGCGACAGCTATGGGGAAGGTGCTGCTATGGACATTGCCATCAGTCTGTTTGAGGAGATGAACCAG
AGGGACCTTGCTGAAAAAATCCTTGATGAGAAGGTGAAAGAGTATAAGCAGAAATACACAGAGCACGTGGCCAGAGAGTT
CCTGCAGTACAAAGAGGCGAATTCCTGCCTAGGGGAGAACCTGTCTGTGCGCGACCGCTACACCAACCTGACCATAGCCA
GGAAGTCTTGGGATCAGCACGGAGATGAGCCTGGAGATGTCAGCTCTGACACTGTCACCACACAAACACTCTTTGAACCC
AGCAAAGATGGCCAGGTGCCTCTGATCACGGTGCTGGTGGGTGCCTCTGGCATGGGGAAGACGATGACGATCAGGAAGGT
GATGATGGAGTGGGTGGAAGGGACCCTCTGCACACAGTTTGACTATGTCTTCTGCATAGACTGCAAGGAGCTTTCCTTTT
CCAAAGAAGTGAGCATGGTGGACCTGATTTCAAAATGCTGCCCTCAACAGCGAATGCCGGCTGGAAGGATTTTGGGTAAC
CCGGAGAAGATCCTGTTCATCTTTGATAGCTTTGAGGCCCTGGGATTGCCCTTGGCTCAGCCGAAGGACGAGCTGAGCAC
TGACCCCACGGAAGCCAGACCACTGGAAACCACCCTGCTGAGCTTGCTCAGGAGAACAGTCCTCCCTGAGTCCTCTGTGC
TCATTGCCACGAGACCAGCAGCTCTCCAGAGCCTGGGGCAGTGCCTGGAGGGCAAGCATTATGTGGAAATCCTGGGGTTT
TCACCAGCTGCAAGGGAGGAGTATTTCCACAGGTATTTTGGGAATGACAATAAAGCAGATGTGGCCTTCAGGTTTACCAG
GGGAAATGAGGTCCTCTACAGCTTGTGTGTCATCCCCGTCATGAGCTGGACTGTCTGCACCGTCCTTGAGCGAGAGCTGT
ACGAGAGGAATCAGCTCCTTGCGTGCTCTAAGACCACCACACAGATGATCATGTTCTACCTCTCCTGGTTAATGAAGCAT
AGAGTCAGCAATGCCTGGCAGAACCTGCAGCAGTTCCTGCACAAGCTTTGCTCCTTGGCTGCTGACGGCATCTGGAAGCA
CAAGGTCCTCTTTGAGGAGAAGGAAATTGAGGACCAAGGCCTGAATCAGCCACAGCTCCTCTCCCTCTTCCTCAATGAGA
AAGGTTTGGAGAAAGGCACAGACCATGTGAATGTCTACAGCTTCAGCCACCTGCACCTCCAGGAGCTCTTCGCAGCGATG
TTTTACGTCCTGGAGGACCAGGACGGAATGGTCAGTGACTCACGGATCCTTGCAAAGGACGTGAATATGTTGTTAGAAAG
CTACCACACATCTAGGATGGATTTAAACGTCACAGTGAGGCTCCTGTTTGGTCTGGTGAACCCCAAGTCAGTAGAGTACG
CGGGTGAAGGAATCGGGTGCAGAATTTCATTGCAACCTCGGGAAGATCTGCTGAGGTGGCTTCAGACACGGCCCAGAGGC
ACTTCCCATCCCCGCGAAGTGATGAAGATTGAGGATTTGGACACCTTCCACCTTTTATTCGAGACAAACGAAAAAAGCTT
TGTGCAGAGCGTGTTGGGCAGTTTCACAGGAATAGCCTTGCAGGACGTCAAGCTGACACTGTATGACCAGGCGGCTCTTT
GCTTCTGCATCAAGCAGTGGGCCGGGCTGCTCAGTGTCACCCTCCGGAGCTGCTCTTTCCACCAGCAGCATCACAGGCAG
GAGCCAGCCAAGGGCTTGCCCCGGCAGAGCTGGCAGCAGGAGGAGCTGCACTCACCTCTGCACCCGCTGTGCCAGGCCCT
GGGGCACCCAGGCAGCTCACTCCAGAGCCTCAGGCTGCAGTGGTGCGGGCTGACGGAGGGTGACAGCGGGGCGCTGGGGA
CGCTGCTGGCCACGCTCCCCAGCCTGGTCCACTTGGAGCTGGGCGACGGAGCGCTGGGTGATGATGGTGTGAGGATGCTC
TGTGCCGGGCTGCGCCAACCCGGCTGCCAGCTGCGTGTCCTGCGGGAATGA
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6楼2015-10-19 14:23:51
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
784269560: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-10-22 15:52:29
引用回帖:
6楼: Originally posted by 784269560 at 2015-10-19 14:23:51
ATGTTGGCAGGAGAAGAAAGCACCATCCTCTTAGAAGCACTGGAAGGTCTCACACTCGAAGACTTCCAAGAGTTCAAGAA
GAAGCTGCCACACACTGATATCGAAGGAGGCTGGAACATCGGCAGGGATGAGCTGGAGAAGGTCACCCATCCTTCCTCAC
TCATCAGTTATATGGGCGACAGCTATGGGGAAGG ...

这个基因是没有问题的，那你就多摸索一下表达条件，载体一时两时不好换，你就换个表达菌株 BL21 表达条件换成15度试试看，完了再说
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8楼2015-10-20 16:05:29
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普通回帖

tolobio

新虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 应助指数-1, 请勿刷应助指数，已经看到您很多次无用的应助了。谢谢你的理解与配合。 2015-10-17 18:03:06
蛋白各不相同。即使别人做过，也很难给你什么有用的建议。基本的摸索大家都差不多：比如换宿主，换tag，换诱导条件等等。比较麻烦。建议还是找公司来做比较省事：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154
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2楼2015-10-16 15:35:34
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MarchZR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-17 18:02:08
你这是原核真核表达，哦rossta是原核表达哈，100kb也不小了，你这没表达，是上清没有表达还是沉淀没有表达，如果是上清，估计你的目的条带在沉淀里吧，形成包涵体了，说点明白些吧
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3楼2015-10-16 15:50:04
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784269560

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by MarchZR at 2015-10-16 15:50:04
你这是原核真核表达，哦rossta是原核表达哈，100kb也不小了，你这没表达，是上清没有表达还是沉淀没有表达，如果是上清，估计你的目的条带在沉淀里吧，形成包涵体了，说点明白些吧...

我只是初步诱导，就是直接拿菌液加上样缓冲液混匀煮沸离心取上清加的样，但是一点目的带都没有。完全没有表达
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4楼2015-10-17 10:01:17
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 784269560 at 2015-10-17 10:01:17
我只是初步诱导，就是直接拿菌液加上样缓冲液混匀煮沸离心取上清加的样，但是一点目的带都没有。完全没有表达...

啥都不说 上序列
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5楼2015-10-19 11:05:19
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粒粒分明

新虫 (初入文坛)
换一下表达菌株呢？我通常都是Pet系列载体用BL21菌株

发自小木虫IOS客户端
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7楼2015-10-19 14:37:35
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784269560

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 粒粒分明 at 2015-10-19 14:37:35
换一下表达菌株呢？我通常都是Pet系列载体用BL21菌株

两者差别应该不大吧，好像rossta比BL21好一些吧，可以翻译稀有密码子
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9楼2015-10-22 16:08:51
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粒粒分明

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 784269560 at 2015-10-22 16:08:51
两者差别应该不大吧，好像rossta比BL21好一些吧，可以翻译稀有密码子...

你检索了吗？稀有密码子多吗？

发自小木虫IOS客户端
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10楼2015-10-22 16:44:32
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